溫度依賴型性別決定（temperature-dependent sex determination,TSD）是一種典型的表型可塑性現(xiàn)象,主要存在于一些爬行動(dòng)物中,例如紅耳龜（Trachemys scripta）、密西西比鱷魚(yú)（Alligator mississippiensis）、豹紋守宮（Eublepharis macularius）等。這類爬行動(dòng)物沒(méi)有性染色體、根據(jù)孵化溫度范圍來(lái)決定個(gè)體性別,其中,紅耳龜能在較小的孵化溫度范圍（26℃～32℃）內(nèi)產(chǎn)出不同性別比率的后代。不同于研究較深入的基因型性別決定（genetic sex determination,GSD）(主要存在于哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類),TSD的機(jī)制研究較為膚淺,許多謎團(tuán)未被破解。本文對(duì)紅耳龜性別決定機(jī)理展開(kāi)研究,15期之前紅耳龜性腺并未形成,隨著性腺發(fā)育至熱敏期（15-19期,也稱性別決定時(shí)期）時(shí),呈現(xiàn)出溫度依賴性差異表達(dá)模式（如Dmrt1、Sox9、AMH等基因）。Foxl2作為一個(gè)遍布脊椎動(dòng)物各門(mén)間高度保守的雌性基因,許多研究?jī)H檢測(cè)了Foxl2的表達(dá)模式,并未進(jìn)行功能研究。本研究通過(guò)對(duì)紅耳龜早期胚胎性腺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,篩...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脊椎動(dòng)物類性別決定
        1.1.1 哺乳動(dòng)物類性別決定
        1.1.2 鳥(niǎo)類性別決定
        1.1.3 爬行動(dòng)物類性別決定
        1.1.4 兩棲動(dòng)物類性別決定
        1.1.5 魚(yú)類性別決定
    1.2 Foxl2在脊椎動(dòng)物性別決定中的研究進(jìn)展
    1.3 Foxl2在爬行動(dòng)物中的研究進(jìn)展
    1.4 本研究目的和意義
第二章 紅耳龜性腺轉(zhuǎn)錄組分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和主要試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.3.1 性腺組織RNA提取、cDNA文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序
            2.1.3.2 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估分析
            2.1.3.3 基因表達(dá)水平的量化
            2.1.3.4 差異表達(dá)分析
            2.1.3.5 差異表達(dá)基因GO富集分析
            2.1.3.6 KEGG通路富集分析
            2.1.3.7 性別決定和性別分化相關(guān)基因的篩選
            2.1.3.8 部分性別發(fā)育相關(guān)基因的驗(yàn)證
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        2.2.3 差異表達(dá)基因分析
        2.2.4 性腺差異表達(dá)基因GO富集、KEGG分析
        2.2.5 篩選性別決定和性別分化相關(guān)基因
        2.2.6 部分性別發(fā)育相關(guān)基因的驗(yàn)證
    2.3 討論
第三章 紅耳龜Foxl2 基因的cDNA克隆和表達(dá)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和主要試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.3.1 各組織RNA提取及cDNA合成
            3.1.3.2 第一鏈cDNA合成
            3.1.3.3 TA克隆
            3.1.3.4 菌液PCR檢測(cè)和送樣測(cè)序
            3.1.3.5 Foxl2基因序列拼接及生物信息學(xué)分析
            3.1.3.6 半定量PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.1.3.7 數(shù)據(jù)分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 紅耳龜Foxl2 基因的cDNA全長(zhǎng)克隆、同源性分析
        3.2.2 Foxl2在紅耳龜不同組織中的表達(dá)分析
        3.2.3 Foxl2在紅耳龜不同胚胎時(shí)期性腺中的表達(dá)分析
        3.2.4 Foxl2關(guān)于溫度的敏感性分析
        3.2.5 雌二醇E2誘導(dǎo)的性逆轉(zhuǎn)中Foxl2的表達(dá)分析
    3.3 討論
第四章 Foxl2的功能研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和主要試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.1.3.1 Foxl2慢病毒載體的構(gòu)建及龜胚侵染
            4.1.3.2 RNA提取cDNA合成
            4.1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            4.1.3.4 石蠟切片
            4.1.3.5 蘇木素-伊紅(H&E)染色
            4.1.3.6 免疫熒光染色
            4.1.3.7 數(shù)據(jù)分析
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 Foxl2功能缺失研究
            4.2.1.1 Foxl2-慢病毒載體干擾后的有效性分析
            4.2.1.2 Foxl2 基因敲低后FPT性腺組織形態(tài)學(xué)變化
            4.2.1.3 Foxl2 基因敲低后FPT性腺雄性特異性基因表達(dá)變化
            4.2.1.4 Foxl2 基因敲低后FPT性腺生殖細(xì)胞分布變化
        4.2.2 Foxl2功能獲得研究
            4.2.2.1 Foxl2 基因過(guò)表達(dá)后MPT性腺組織形態(tài)學(xué)變化
            4.2.2.2 Foxl2 基因過(guò)表達(dá)后MPT性腺雄性特異性基因表達(dá)變化
            4.2.2.3 Foxl2 基因過(guò)表達(dá)后MPT性腺生殖細(xì)胞分布變化
    4.3 討論
第五章 小結(jié)與展望
    5.1 小結(jié)
    5.2 本文的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 本文的不足與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 科研成果及資助單位(人)
致謝



本文編號(hào)：4023974