轉(zhuǎn)基因技術(shù)是改良生物性狀的重要手段，其主要方法包括顯微注射、精子 介導(dǎo)法、電穿孔等。顯微注射在魚(yú)類(lèi)的應(yīng)用中存在一些技術(shù)難題，一直未有突破性的進(jìn)展。精子介導(dǎo)法轉(zhuǎn)基因（Sperm-mediated gene transfer，SMGT）操作簡(jiǎn)便、成本低，同時(shí)避開(kāi)了魚(yú)類(lèi)受精卵各種特性的限制，在轉(zhuǎn)基因魚(yú)的制備中具有優(yōu)勢(shì)。目前魚(yú)類(lèi)SMGT技術(shù)應(yīng)用仍處于初步階段，存在不穩(wěn)定，重復(fù)性差等問(wèn)題，不同魚(yú)種需要針對(duì)性地研究具體的精子介導(dǎo)方式和處理?xiàng)l件。真鯛（Pagrus major）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種，本論文以這兩種海水魚(yú)為材料，研究分析外源DNA對(duì)其精子生理特性的影響及其轉(zhuǎn)染效果，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討這兩種海水魚(yú)類(lèi)SMGT技術(shù)的可行性和改進(jìn)方法，主要結(jié)果如下： 1）外源DNA對(duì)真鯛精子活力的影響并不顯著，僅在質(zhì)粒pPmvasGFP達(dá)到2μg/106個(gè)精子的高濃度時(shí)，精子的運(yùn)動(dòng)速度稍有下降，5μg/106個(gè)精子的pPmvasGFP質(zhì)粒孵育精子12h后，平均直線速度（VSL）相較于對(duì)照組低22.0%，但平均曲線速度（VCL）和精子活率（MOT）和并未減...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SMGT 技術(shù)概述
        1.1.1 SMGT 技術(shù)的起源與發(fā)展
        1.1.2 SMGT 技術(shù)的改進(jìn)
        1.1.3 SMGT 技術(shù)的機(jī)理研究
    1.2 SMGT 技術(shù)在魚(yú)類(lèi)的研究進(jìn)展
        1.2.1 研究成果和現(xiàn)狀
        1.2.2 海水魚(yú)類(lèi) SMGT
        1.2.3 魚(yú)類(lèi) SMGT 的影響因素
    1.3 本研究的目的及意義
第二章 真鯛精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    2.1 研究背景
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 試劑和儀器
        2.2.3 質(zhì)粒提取和 DNA 片段合成
        2.2.4 精子解凍和精漿去除
        2.2.5 外源 DNA 孵育真鯛精子與檢測(cè)觀察
        2.2.6 真鯛人工授精實(shí)驗(yàn)和仔魚(yú)檢測(cè)
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 外源 DNA 對(duì)真鯛精子活力的影響
        2.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后熒光觀察
        2.3.3 PCR 檢測(cè)
        2.3.4 真鯛 SMGT 實(shí)驗(yàn)和子代檢測(cè)
    2.4 討論
第三章 大菱鲆精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    3.1 研究背景
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 試劑和儀器
        3.2.3 質(zhì)粒的提取和 DNA 片段合成
        3.2.4 精子解凍和精漿去除
        3.2.5 外源 DNA 孵育大菱鲆精子與檢測(cè)觀察
        3.2.6 大菱鲆人工授精實(shí)驗(yàn)和仔魚(yú)檢測(cè)
        3.2.7 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 外源 DNA 對(duì)大菱鲆精子活力的影響
        3.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后熒光觀察
        3.3.3 PCR 檢測(cè)
        3.3.4 大菱鲆人工授精實(shí)驗(yàn)和子代檢測(cè)
    3.4 討論
第四章 轉(zhuǎn)基因相關(guān)工作——大菱鲆 vasa 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列獲得及表達(dá)載體構(gòu)建
    4.1 研究背景
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 試劑與儀器
        4.2.3 大菱鲆 vasa 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列克隆
        4.2.4 大菱鲆 vasa 基因 5’調(diào)控序列分析
        4.2.5 pSMvasGFP 轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體構(gòu)建
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 大菱鲆 vasa 基因 5’和 3’側(cè)翼序列克隆
        4.3.2 大菱鲆 vasa 基因 5’調(diào)控序列的生物信息學(xué)分析
        4.3.3 pSMvasGFP 表達(dá)載體構(gòu)建
    4.4 討論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
文章撰寫(xiě)和發(fā)表情況



本文編號(hào)：3852111