采用¹³C穩(wěn)定同位素示蹤技術(shù)結(jié)合高分辨質(zhì)譜方法,研究了小硅藻中4類光合膜脂（二酰甘油單半乳糖脂（MGDG）、二酰甘油雙半乳糖脂（DGDG）、二酰甘油硫代糖脂（SQDG）和磷脂酰甘油（PG））的合成途徑。與通過物質(zhì)含量的變化進行合成與代謝途徑研究的傳統(tǒng)方法相比,本方法更直觀、準確地闡明了小硅藻光合膜脂中碳原子的去向。研究結(jié)果表明,小硅藻中4類光合膜脂均被標記,且標記含量在小硅藻生長周期的整個平臺期逐漸增加。對二級質(zhì)譜碎裂片段分析結(jié)果表明,光合膜脂的空間結(jié)構(gòu)在¹³C標記方面起著決定性作用,即4類光合膜脂的極性頭部被優(yōu)先標記,其次是甘油骨架,最后是兩條脂肪酸酰基鏈,且兩條脂酰鏈的位置差別影響不大,幾乎是同步合成。本方法可以直觀準確地闡明小硅藻中光合膜脂對碳原子的利用途徑,為相關(guān)研究提供了參考。 

【文章來源】：分析化學(xué). 2020,48(06)北大核心EISCICSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

對照組(A)和實驗組13C同位素標記4天(B)及13C同位素標記10天(C)中MGDG-(20∶5～16∶2)的質(zhì)譜圖

圖2 對照組(A)和實驗組13C同位素標記4天(B)及13C同位素標記10天(C)中MGDG-(20∶5～16∶2)的質(zhì)譜圖通過對上述化合物,包括對照組的m/z 779.5269和13C同位素標記后的m/z 785.5474、802.6144、819.6035進行二級質(zhì)譜掃描,對產(chǎn)生的碎裂片段進行質(zhì)譜解析,進一步確定13C同位素的具體標記位置(圖4)。由圖4A可知,m/z 779.5269在碰撞能下產(chǎn)生的主要碎裂片段離子有3個: m/z 227.1063 [C9H16O6Li]+是極性頭部單半乳糖CO鍵斷裂,經(jīng)過重排反應(yīng)得到Li+后形成的,可作為MGDG特征片段離子; m/z 475.3151 [M+Li-R2COOH]+和m/z 529.3255 [M+Li-R1COOH]+,是�；溤谀鸽x子基礎(chǔ)上發(fā)生中性丟失后形成的,酰基鏈分別為FA 20∶5和FA 16∶2,通過比較豐度值,可最終確定此化合物為MGDG-(20∶5～16∶2)。

采用血球計數(shù)板計量藻種密度并繪制生長曲線,由圖1可知,小硅藻培養(yǎng)的0～9天屬于對數(shù)期,10～20天為平臺期,從21天開始進入衰敗期。研究表明,小硅藻體內(nèi)脂類化合物在平臺期大量合成并積累,因此選擇處于平臺初期的小硅藻進行標記實驗。藻種培養(yǎng)至平臺初期后,分別取600 mL均分至18個錐形瓶,劃分成實驗組和對照組,按照2.2節(jié)方法,進行小硅藻光合膜脂類13C同位素標記。3.2 提取液的選擇

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小硅藻光合作用脂13C穩(wěn)定同位素定量標記分析[J]. 宗春光,李雙,徐繼林,李艷榮,鐘鶯鶯,俞雪鈞,周成旭,嚴小軍.  分析化學(xué). 2016(11)
[2]海洋微藻中脂質(zhì)13C穩(wěn)定同位素標記LC-MS[J]. 李艷榮,徐繼林,嚴小軍,周成旭,陳娟娟.  中國科技論文. 2014(09)



本文編號：3306335