日本沼蝦隸屬十足目、長臂蝦科、沼蝦屬，自然分布于中國、日本、越南及俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)，在我國各地淡水水域中都有分布。日本沼蝦的養(yǎng)殖始于二十世紀(jì)五十年代，從2004年起，我國日本沼蝦的年養(yǎng)殖產(chǎn)量就超過了20萬噸。多年來，日本沼蝦在市場上一直供不應(yīng)求，暢銷不衰，是一種養(yǎng)殖效益非�？捎^的淡水蝦類。但長期以來，繁殖日本沼蝦用的親本多為野生個(gè)體，未經(jīng)過系統(tǒng)選育，日本沼蝦的養(yǎng)殖單產(chǎn)較低，且多是套養(yǎng)在各種魚類的養(yǎng)殖池塘中，主養(yǎng)日本沼蝦的池塘較少。因此開展日本沼蝦的種質(zhì)資源保護(hù)、良種選育工作是當(dāng)前日本沼蝦養(yǎng)殖業(yè)中亟待解決的問題。由于當(dāng)前已知的日本沼蝦微衛(wèi)星標(biāo)記只有二十多個(gè)，這嚴(yán)重地限制了日本沼蝦的群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、種質(zhì)資源評價(jià)等工作；此外，日本沼蝦雄性生長速度顯著大于雌性，開展單性苗種培育意義重大，但當(dāng)前沒有鑒別日本沼蝦遺傳性別的分子標(biāo)記，使得單性苗種培育工作一直無法得以開展。本論文的研究內(nèi)容主要包含如下3個(gè)方面：1.日本沼蝦多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)：（1）FIASCO法開發(fā)微衛(wèi)星標(biāo)記。通過生物素標(biāo)記的探針（GT）13和（GA）13富集微衛(wèi)星序列，共獲得含微衛(wèi)星的序列334個(gè)，成功設(shè)計(jì)引物110對，設(shè)計(jì)引物... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
1、引言
    1.1 分子標(biāo)記技術(shù)簡介
        1.1.1 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）標(biāo)記
        1.1.2 RAPD（random amplified polymorphic DNA）技術(shù)
        1.1.3 AFLP（amplified fragment length polymorphism）標(biāo)記
        1.1.4 SSR（simple sequence repeats）標(biāo)記
        1.1.5 SNP（Single Nucleotide Polymorphisms）標(biāo)記
    1.2 微衛(wèi)星位點(diǎn)分離方法
        1.2.1 傳統(tǒng)方法
        1.2.2 微衛(wèi)星富集法
        1.2.3 FIASCO 法
        1.2.4 數(shù)據(jù)查找法
        1.2.5 近緣物種篩選法
    1.3 分子標(biāo)記技術(shù)在蝦類遺傳多樣性研究中的應(yīng)用
        1.3.1 分子標(biāo)記在野生蝦類遺傳多樣性中的應(yīng)用
        1.3.2 分子標(biāo)記在養(yǎng)殖與野生蝦類間的遺傳多樣性研究中的應(yīng)用
    1.4 蝦蟹類的性別決定及性別相關(guān)分子標(biāo)記的研究
    1.5 日本沼蝦研究現(xiàn)狀
        1.5.1 日本沼蝦分子標(biāo)記開發(fā)及遺傳多樣性分析研究現(xiàn)狀
        1.5.2 日本沼蝦性別相關(guān)基因及分子標(biāo)記研究現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的、意義
2、材料與方法
    2.1 試驗(yàn)用日本沼蝦
    2.2 試劑和儀器
    2.3 基因組 DNA 提取
    2.4 微衛(wèi)星基因組富集文庫構(gòu)建
        2.4.1 基因組 DNA 酶切
        2.4.2 接頭的制備
        2.4.3 連接
        2.4.4 預(yù)擴(kuò)增
        2.4.5 生物素探針雜交
        2.4.6 磁珠富集
        2.4.7 PCR 擴(kuò)增
        2.4.8 克隆、測序
    2.5 ISSR-PCR 法開發(fā)微衛(wèi)星標(biāo)記
    2.6 序列分析及微衛(wèi)星引物設(shè)計(jì)
    2.7 PAGE
    2.8 熒光標(biāo)記 SSR
    2.9 AFLP
        2.9.1 基因組 DNA 提取
        2.9.2 限制性酶切及連接
        2.9.3 預(yù)擴(kuò)增
        2.9.4 選擇性擴(kuò)增
    2.10 數(shù)據(jù)分析
3、結(jié)果
    3.1 FIASCO 法開發(fā)多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記
        3.1.1 FIASCO 文庫構(gòu)建結(jié)果
        3.1.2 測序統(tǒng)計(jì)及引物設(shè)計(jì)
        3.1.3 微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性分析
    3.2 ISSR-PCR 法開發(fā)微衛(wèi)星標(biāo)記結(jié)果
        3.2.1 ISSR-PCR 法預(yù)擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.2 克隆后菌液檢測結(jié)果
        3.2.3 測序統(tǒng)計(jì)及引物設(shè)計(jì)結(jié)果
        3.2.4 微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性分析
    3.3 開發(fā)的微衛(wèi)星序列特征分析
    3.4 4 個(gè)日本沼蝦群體遺傳結(jié)構(gòu)分析
        3.4.1 4 個(gè)日本沼蝦群體熒光 SSR 基因分型結(jié)果
        3.4.2 4 個(gè)日本沼蝦群體的遺傳多樣性
        3.4.3 群體遺傳分化和遺傳距離
        3.4.4 4 個(gè)日本沼蝦群體遺傳分化
    3.5 日本沼蝦性別相關(guān)分子標(biāo)記篩選
        3.5.1 基因組 DNA 的提取
        3.5.2 性別相關(guān) SSR 標(biāo)記的篩選
        3.5.3 基因組 DNA 酶切、預(yù)擴(kuò)增
        3.5.4 選擇性擴(kuò)增和性別相關(guān) AFLP 分子標(biāo)記的篩選
4、討論
    4.1 微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)
        4.1.1 微衛(wèi)星位點(diǎn)的分離方法
        4.1.2 微衛(wèi)星標(biāo)記效用的評價(jià)
        4.1.3 I型微衛(wèi)星標(biāo)記的分離
    4.2 微衛(wèi)星二核苷酸的重復(fù)類型
    4.3 群體遺傳結(jié)構(gòu)分析
    4.4 性別相關(guān)分子標(biāo)記
5.結(jié)論
6.主要參考文獻(xiàn)
7. 致謝
8. 讀博期間發(fā)表文章情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]青蝦性別相關(guān)分子標(biāo)記的研究[D]. 李慧萍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3185258