遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda,E.tarda）是重要的革蘭氏陰性致病菌,其宿主范圍極廣,可以感染魚類、兩棲類、爬行類、哺乳動(dòng)物以及人類,最常見(jiàn)的宿主是魚類。E.tarcda既能感染咸水魚也能感染淡水魚,是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見(jiàn)病原菌,它能使魚類患愛(ài)德華氏菌�。‥dwardsiellosis）,每年都會(huì)給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對(duì)于愛(ài)德華氏菌病的防治以化學(xué)防治法為主,雖然有多個(gè)課題組致力于愛(ài)德華氏菌病疫苗的研究,但目前都沒(méi)有商業(yè)化的疫苗可用。Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type Ⅲ Secretion System,T3SS）廣泛存在于動(dòng)植物革蘭氏陰性病原菌中,病原菌利用T3SS將毒力蛋白（effectors,效應(yīng)蛋白）“注射”到宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi),干擾宿主的正常生理活動(dòng)。T3SS是E.tarda重要的致病因子,E.tarda利用T3SS將效應(yīng)蛋白輸送到魚體細(xì)胞內(nèi),使魚類患敗血病死亡。T3SS的針狀結(jié)構(gòu)由超過(guò)100個(gè)needle蛋白構(gòu)成。研究表明,T3SS的針狀結(jié)構(gòu)是由needle蛋白的C端通過(guò)疏水相互作用有規(guī)律地聚集組裝而成。EsaG是組裝遲緩愛(ài)德華氏菌T3SS針狀結(jié)構(gòu)的基... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 遲緩愛(ài)德華氏菌
    1.3 Ⅲ型分泌系統(tǒng)概述
    1.4 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的分子伴侶
    1.5 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展
        1.5.1 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)概述
        1.5.2 Needle和Needle蛋白
        1.5.3 Needle蛋白與其分子伴侶復(fù)合物
    1.6 蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)
        1.6.1 酵母雙雜交
        1.6.2 GST pull down
    1.7 結(jié)構(gòu)生物學(xué)
        1.7.1 結(jié)構(gòu)生物學(xué)概述
        1.7.2 蛋白質(zhì)結(jié)晶
        1.7.3 晶體數(shù)據(jù)收集
        1.7.4 晶體結(jié)構(gòu)解析
    1.8 本研究的背景、目的與意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 生物信息學(xué)分析
    2.3 酵母雙雜交
    2.4 表達(dá)載體構(gòu)建
    2.5 蛋白表達(dá)與純化
        2.5.1 蛋白表達(dá)與親和純化
        2.5.2 Orf13/EsaH復(fù)合物表達(dá)與純化
        2.5.3 硒代蛋白的表達(dá)與純化
        2.5.4 EsaG~(33-73)/Orf13/EsaH復(fù)合物表達(dá)與純化
    2.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.6.1 SDS-PAGE
        2.6.2 Tricine-SDS-PAGE
    2.7 結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        2.7.1 結(jié)晶條件的初篩
        2.7.2 晶體的優(yōu)化
    2.8 數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)解析
        2.8.1 衍射數(shù)據(jù)收集
        2.8.2 數(shù)據(jù)處理
        2.8.3 結(jié)構(gòu)解析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 生物信息學(xué)分析
        3.1.1 結(jié)構(gòu)域分析
        3.1.2 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    3.2 酵母雙雜交
    3.3 蛋白表達(dá)純化
        3.3.1 融合蛋白表達(dá)純化
        3.3.2 Orf13/EsaH表達(dá)純化
        3.3.3 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物表達(dá)純化
    3.4 結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        3.4.1 Orf13/EsaH復(fù)合物結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        3.4.2 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
    3.5 衍射數(shù)據(jù)收集與處理
    3.6 晶體結(jié)構(gòu)解析與修正
        3.6.1 晶胞內(nèi)容分析
        3.6.2 晶體結(jié)構(gòu)解析
    3.7 Orf13/EsaH復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)
    3.8 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)
4 討論
    4.1 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論
    4.2 EsaH的生物學(xué)功能
    4.3 EsaG~(33-54)是否在晶體中
    4.4 潛在的藥物設(shè)計(jì)價(jià)值
    4.5 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 溶液配制
附錄Ⅱ 分子克隆反應(yīng)體系
附錄Ⅲ 數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)修正統(tǒng)計(jì)信息
致謝



本文編號(hào)：3185161