固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)是淡、海水中常見(jiàn)的原生動(dòng)物,可附著于十足目甲殼動(dòng)物的外骨骼和鰓絲。其附著行為能直接或間接地危害宿主的生命活動(dòng)。為了給淡水甲殼動(dòng)物固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)病的檢測(cè)和防控提供基礎(chǔ)性資料,本研究以克氏原螯蝦體表固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)為對(duì)象,通過(guò)活體觀(guān)察、蛋白銀染色和分子序列比對(duì)的方法對(duì)克氏原螯蝦體表的固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)進(jìn)行了物種鑒定,并在湖北省孝感市云夢(mèng)縣和武漢市蔡甸區(qū)展開(kāi)了為期一年的周期性調(diào)查,闡明了克氏原螯蝦顎足、步足和鰓絲上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的周期性變化規(guī)律。以下為本文的主要研究結(jié)果:1、本研究于2016年至2019年,利用形態(tài)學(xué)和分子學(xué)方法,分離并鑒定了湖北省潛江市、武漢市和孝感市養(yǎng)殖克氏原螯蝦體表的7種固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)物種,其中未報(bào)道的新種包括:卵圓累枝蟲(chóng)(Epistylis ovalis sp.n.)、蔡甸累枝蟲(chóng)(E.caidianensis sp.n.)、高盤(pán)累枝蟲(chóng)(E.thckpatella sp.n.)、椎體累枝蟲(chóng)(E.conica sp.n.)和瞄新蓋蟲(chóng)(Opercularia miaoxinensis sp.n.),重描述物種包括節(jié)蓋蟲(chóng)(O.articulata Ehrenberg,1838)和螅狀獨(dú)縮蟲(chóng)(Carchesium polypinum Ehrenberg,1831)。卵圓累枝蟲(chóng)附著于克氏原螯蝦的步足和顎足,其蟲(chóng)體呈卵圓型,單個(gè)伸縮泡位于口圍唇下方,C型大核橫向排列,主柄呈傘狀,次級(jí)柄呈二分叉型,與E.chlorelligerum的SSU rDNA序列相似度最高(98.4%)。蔡甸累枝蟲(chóng)附著于克氏原螯蝦的顎足、步足和游泳足,其蟲(chóng)體呈花瓶型,伸縮泡位于口圍唇上方,C型大核橫向位于口圍唇下方,柄呈二分叉型,與E.wuhanensis的SSU rDNA序列相似度最高(97.5%)。高盤(pán)累枝蟲(chóng)附著于克氏原螯蝦的顎足、步足和鰓絲,其蟲(chóng)體呈花瓶型,口圍盤(pán)呈半圓型,單個(gè)伸縮泡位于口圍唇下方,與E.chlorelligerum的SSU rDNA序列相似度最高(99.0%)。椎體累枝蟲(chóng)附著于克氏原螯蝦的顎足和步足,蟲(chóng)體呈椎體型,伸縮泡位于口圍唇上方,C型大核橫向位于口圍唇下方,與E.riograndensis的SSU rDNA序列相似度最高(99.0%)。瞄新蓋蟲(chóng)附著于克氏原螯蝦步足,蟲(chóng)體呈紡錘型,伸縮泡位于口漏斗腹側(cè),C型大核位于伸縮泡下方,與Telotrochidium matiense的SSU rDNA序列相似度最高(98.0%)。本文中描述的節(jié)蓋蟲(chóng)和螅狀獨(dú)縮蟲(chóng)分別與之前報(bào)道的物種形態(tài)特征一致,本文補(bǔ)充了節(jié)蓋蟲(chóng)的SSU rDNA、LSU rDNA和ITS1-5.8S-ITS2序列。2、本研究于2018年4月至2019年4月期間對(duì)湖北省孝感市云夢(mèng)縣的289只養(yǎng)殖克氏原螯蝦進(jìn)行檢測(cè),其中顎足、步足和鰓絲上附著固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的克氏原螯蝦分別有151只、65只和6只。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的周期性變化規(guī)律如下:2018年4月至10月,固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)附著量呈持續(xù)下降的趨勢(shì),附著率變化波動(dòng)較大;2018年10月至2019年1月,附著率(40%)和附著量(20個(gè))均處于較低水平;2019年2月至4月,附著率(60%)和附著量(60個(gè))均升高。步足上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的周期性變化如下:2018年4月至9月附著率和附著量的變化波動(dòng)較大;在2018年10月至2019年1月附著率(35%)和附著量(20個(gè))均處于較低水平。鰓絲上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的附著規(guī)律如下:2018年12月至2019年4月期間,水溫在19℃以下時(shí),鰓絲上出現(xiàn)固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)附著的現(xiàn)象。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足和步足上的附著頻次最高的固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)為累枝蟲(chóng)屬物種,鰓絲上為獨(dú)縮蟲(chóng)屬物種。3、本研究于2018年4月至2019年3月期間對(duì)湖北省武漢市蔡甸區(qū)的192只克氏原螯蝦進(jìn)行檢測(cè),顎足、步足和鰓絲上附著固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的克氏原螯蝦分別有112只、68只和16只。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)在采樣期間的周期性變化如下:2018年4月至10月期間,除9月外,其它時(shí)期固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的附著率均在60%–95%范圍內(nèi)波動(dòng),附著量在此時(shí)間段內(nèi)變化波動(dòng)較大;2018年11月至2019年2月,固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的附著率(20%)和附著量(10個(gè))均處于較低水平。步足固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的周期性變化如下:2018年4月至11月,附著率和附著量的變化趨勢(shì)一致,且波動(dòng)較大;2018年12月至2019年2月,附著率(20%)和附著量(10個(gè))均處于較低水平。鰓絲上固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的變化如下:2018年6月至9月,水溫處于29℃以上時(shí),鰓絲上未發(fā)現(xiàn)固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)附著。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足和步足上出現(xiàn)頻次最高的固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)為累枝蟲(chóng)屬物種,鰓絲上出現(xiàn)頻次最高的固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)為獨(dú)縮蟲(chóng)屬物種。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S941.5
【部分圖文】：

高盤(pán)累枝蟲(chóng)（圖 2-1c,d）,椎體累枝蟲(chóng)（圖 2-1e）。蓋蟲(chóng)屬物種包括：瞄新蓋蟲(chóng)（圖 2-1f）和節(jié)蓋蟲(chóng)（圖2-1 g）。獨(dú)縮蟲(chóng)屬物種包括螅狀獨(dú)縮蟲(chóng)（圖 2-1 h）。圖 2-1 固著類(lèi)纖毛蟲(chóng)的手繪圖a. 卵圓累枝蟲(chóng). b. 蔡甸累枝蟲(chóng). c. 高盤(pán)累枝蟲(chóng)種群 I. d. 高盤(pán)累枝蟲(chóng)種群 II. e. 椎體累枝蟲(chóng). f. 瞄新蓋蟲(chóng). g. 節(jié)蓋蟲(chóng). h. 螅狀獨(dú)縮蟲(chóng). 比例尺: a, e-h = 10 μm; b-d = 20μmFig. 2-1 Drawing from in vivo sessilid species.a. Epistylis ovalis sp. n. b. Epistylis caidianensis sp. n. c. Population I of Epistylis thickpatella n. sp. d. Population IIEpistylis thickpatella n. sp. e. Epistylis conica sp. n. f. Opercularia miaoxinensis sp. n. g. Opercularia articulata. h.Carchesium polypinum. Scale bars: a, e-h = 10 μm; b-d = 20μm2.1 累枝蟲(chóng)屬累枝蟲(chóng)屬物種的形態(tài)特征為：營(yíng)群體生活，柄內(nèi)無(wú)肌絲，具有膨大的口圍唇，口區(qū)纖毛在口圍盤(pán)環(huán)繞的圈數(shù)低于 2 圈（Lynn 2008）。本研究從克氏原螯蝦體表分離并鑒定了 4 種累枝蟲(chóng)屬的物種。

2 卵圓累枝蟲(chóng)活體照片縮泡；In, 口漏斗；Ma, 大核；PD, 口圍盤(pán)；PL, 口圍唇；St, 柄.：a = 400 μm; b, d-h = 10 μm; c = 50 μm; i = 20 μm-2 Photomicrographs of Epistylis ovalis sp. n in vivontractile vacuole; In, infundibulum, Ma: macronucleus; PD, peristomial disk; PL, peristomial lip; St, Stalbars: a = 400 μm; b, d-h = 10 μm; c = 50 μm; i = 20 μm蛋白銀染色結(jié)果：經(jīng)過(guò)蛋白銀染色，可見(jiàn)反口纖毛環(huán)（ATB）圍繞蟲(chóng)體后四（圖 2-3a）。在蟲(chóng)體口區(qū)開(kāi)口處，單毛基列和復(fù)毛基列同時(shí)出現(xiàn)且彼此平行 1.75 圈后，向相反方向螺旋向下延伸至口漏斗底部（圖 2-3b）。口區(qū)小膜（在單毛基列和復(fù)毛基列開(kāi)口處（圖 2-3b）。生發(fā)毛基列（G）呈波浪型，位列上方（圖 2-3b,c）。復(fù)毛基列在與單毛基列分開(kāi)后形成咽膜 1-3（P1-3）分別由 3 條毛基列組成；P1 的 3 條毛基列發(fā)生于同一點(diǎn)，且末端等長(zhǎng)（；P2 靠里的 2 條毛基列與 P1 發(fā)生于同一點(diǎn)，靠外毛基列的發(fā)生處稍微偏

圖 2-3 卵圓累枝蟲(chóng)蛋白銀染色照片ATB, 反口纖毛環(huán); EM, 口區(qū)小膜; G, 生發(fā)毛基列; H, 單毛基列; Ma, 大核; P1–3, 咽膜 1–3; P, 復(fù)毛基列.比例尺= 10 μmFig. Photomicrographs of Epistylis ovalis sp. n. after protargal-stainedATB, aboral trochal band EM, epistomial membrane; G, germinal kinety; H, haplokinety; Ma, macronucleus; P1–3,peniculi 1–3; P, polykinety. Scale bars= 10 μm分子序列分析：獲得卵圓累枝蟲(chóng) SSU rDNA 序列長(zhǎng)度為 1669bp，GC 含量為42.18%，BLAST 結(jié)果顯示與該序列最相似的物種是綠累枝蟲(chóng)（Epistylischlorelligerum登錄號(hào) KM096375），相似度為 98.4%，相差 26 個(gè)堿基。獲得卵圓累枝蟲(chóng) LSUrDNA序列長(zhǎng)度為1842bp，GC含量為43.3%，BLAST結(jié)果顯示金龜累枝蟲(chóng)（E.chrysemydis，登錄號(hào) KY675197）與該物種的相似度最高，為 98.7%，相差 22 個(gè)堿基。獲得孝感累枝蟲(chóng) ITS1-5.8S-ITS2 序列長(zhǎng)度為 464bp，GC 含量為 32.8%，BLAST 結(jié)果顯示金龜
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