【摘要】：作為我國(guó)淡水養(yǎng)殖的四大家魚之一的草魚,由于味道鮮被廣大消費(fèi)者所喜愛(ài)。草魚是常見(jiàn)優(yōu)質(zhì)蛋白的良好來(lái)源之一,具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,如今草魚越來(lái)越被廣泛地作為原料,來(lái)加工提取各種產(chǎn)品和功能性食品,草魚抗氧化肽便是其中的一種�？寡趸囊郧宄杂苫鶃�(lái)體現(xiàn)它在體內(nèi)的抗氧化性,我們通過(guò)酶解食源性蛋白來(lái)制備出的這種生物活性物質(zhì)�？寡趸牡陌被峤M成和結(jié)構(gòu)都影響著其活性大小,因此,利用現(xiàn)代生物技術(shù)分析抗氧化肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),并以單次口服給藥的方式對(duì)機(jī)體對(duì)干預(yù),了解其在體內(nèi)的抗氧化性和代謝規(guī)律,為完善抗氧化肽在體內(nèi)體外的抗氧化機(jī)理奠定了理論基礎(chǔ)。本文優(yōu)化了酶法制備草魚抗氧化肽的工藝條件；分離純化出一種草魚抗氧化肽單體,并成功鑒定出其一級(jí)結(jié)構(gòu)；研究了經(jīng)單次口服給藥后,小鼠體內(nèi)抗氧化肽的吸收、分布情況；對(duì)經(jīng)單次口服干預(yù)后,小鼠血液中酶和MDA的變化情況進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)論如下：1.雙酶復(fù)合酶解法制備草魚抗氧化肽的最佳工藝為：加木瓜蛋白酶800U／g,中性蛋白酶500U/g,pH為6.5,酶解溫度為50℃,酶解時(shí)間4h。得到草魚酶解液對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到93.50%,水解度為35.63%,肽得率為97.29%。相對(duì)于單酶水解不僅提高了水解度和肽得率,同時(shí)提高了對(duì)DPPH自由基的清除率。2.利用超濾分離草魚蛋白酶解液得到小于3kDa的組分清除DPPH自由基的能力最好,抑制率為89.27%。組分經(jīng)過(guò)HPLC的分離純化和N端測(cè)序后,得了出抗氧化活性較好的四肽：WEPH,當(dāng)其濃度為1mg/mL時(shí),對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到73.52%,同時(shí)根據(jù)抗氧化肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析了氨基酸對(duì)肽抗氧化能力的影響。3.鼠單次灌胃2mg/kg·BW, 0.1mL的FITC-WEPH后,血藥濃度表明。給藥后2h血藥濃度達(dá)到最大,并得出其絕對(duì)生物利用率為10.49%。實(shí)驗(yàn)表明,給藥2h之內(nèi),胃腸中的FITC-WEPH分布較多,給藥6h后,所有臟器內(nèi)FITC-WEPH的含量都呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。肝臟中FITC-WEPH的蓄積量較高,代謝較慢,這表明FITC-WEPH參與了肝臟的氧化代謝。在腦中也有分布少量的FITC-WEPH,表明了其可以通過(guò)血腦屏障,參與大腦正常代謝活動(dòng)。4.小鼠經(jīng)單次灌胃2mg/kg,0.1mL的FITC-WEPH對(duì)小鼠血液的酶及MDA均有所影響。給藥后GSH-PX活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在給藥后4h時(shí)達(dá)到最大391.78±29.85U/0.1mL；給藥后MDA含量呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì),給藥2h后,含量達(dá)到最低,為9.90±1.45mol/mL;給藥后T-SOD活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),給藥后2h達(dá)到最高,為142.61±8.09U／mL；給藥后GSH-PX活力呈先上升后下降再上升趨勢(shì),給藥后6h達(dá)到最大值T-AOC為10.566±2.05U/mL 。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：TS254.1

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