發(fā)布時間：2020-06-07 23:52

【摘要】：無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae,SA)是羅非魚(Tilapia)重要病原之一,具有高發(fā)病率和高死亡率等特點,給羅非魚養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失,嚴重制約羅非魚養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展。目前,常用磺胺等抗生素類藥物對其進行防治,然而抗生素類藥物存在病原耐藥和藥物殘留等風險,應(yīng)用嚴重受限。中草藥具有多組分多靶點協(xié)同作用、不易引起病原耐藥、綠色、低毒等優(yōu)勢,被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中,然而中草藥起效慢,對多數(shù)急性病癥治療效果較差,制約了其在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用。中草藥與抗生素聯(lián)合進行應(yīng)用,集兩者優(yōu)勢,擬補各自的不足被認為最有前途的水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治手段之一。本文前期研究已篩選出具有良好抗無乳鏈球菌QH-726活性的雞血藤提取浸膏。在此基礎(chǔ)上,采用瓊脂擴散法(收錄于《中華人民共和國獸藥典》)檢測9種抗生素抗無乳鏈球菌QH-726活性,并繪制雞血藤提取浸膏和具有抗菌活性抗生素的濃度對數(shù)與抑菌圈直徑間標準曲線,合理設(shè)計雞血藤提取浸膏與抗生素復(fù)配方案,并計算各復(fù)方相加效應(yīng)時抑菌圈直徑范圍,依此為標準,抑菌圈直徑大于該范圍則認為雞血藤提取浸膏與抗生素有協(xié)同抗菌作用。采用Box-behnken試驗設(shè)計結(jié)合響應(yīng)面分析優(yōu)化雞血藤提取浸膏與抗生素的最佳配比,并采用梯度稀釋法分別測定雞血藤提取浸膏、抗生素和中西藥復(fù)方的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。結(jié)果顯示土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素3種四環(huán)素類抗生素和硫酸慶大霉素、硫酸新霉素、硫酸鏈霉素3種氨基糖苷類抗生素具有抗無乳鏈球菌QH-726活性。雞血藤提取浸膏與硫酸鏈霉素具有協(xié)同抗無乳鏈球菌QH-726活性。響應(yīng)面優(yōu)化獲得雞血藤提取浸膏與硫酸鏈霉素的最佳復(fù)配比為42.5:1(m:m)。雞血藤提取浸膏、硫酸鏈霉素和它們復(fù)方的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)分別為27.84mg/mL和32.48mg/mL、0.66mg/mL和 0.66mg/mL、5.95mg/mL±0.14mg/mL和 16.15mg/mL±0.3 8mg/mL。采用瓊脂擴散法分別測定雞血藤提取浸膏、硫酸鏈霉素和它們的復(fù)方對4株革蘭氏陽性菌:金黃色葡萄球菌PBSAR03135、無乳鏈球菌PBSA06161、海豚鏈球菌PBSI01168、藤黃微球菌PBML03134和11株革蘭氏陰性菌:需鈉弧菌CGMCC1.1594、創(chuàng)傷弧菌CGMCC1.1758、溶藻弧菌CGMCC1.1587、哈維氏弧菌PBVH06075、副溶血弧菌ATCC17802、大腸埃希氏菌PBEC05143、熒光假單胞菌PBPF01169、遲緩愛德華氏菌PBET01170、摩氏摩根菌PBMM02141、銅綠假單胞菌CMCC(B)10104和大腸埃希氏菌CMCC(B)44102的抗菌活性,同時采用梯度稀釋法分別測定了復(fù)方對以上菌株的MIC和MBC。結(jié)果表明:0.24mg/mL硫酸鏈霉素對4株革蘭氏陽性菌均有抗菌活性,對需鈉弧菌CGMCC1.1594、創(chuàng)傷弧菌CGMCC1.1758、哈維氏弧菌PBVH06075、副溶血弧菌ATCC17802和大腸埃希氏菌CMCC(B)44102之外的7株革蘭氏陰性菌有抗菌活性;27.84mg/mL雞血藤提取浸膏對藤黃微球菌PBML03134之外的3株革蘭氏陽性菌有抗菌活性,對5株革蘭氏陰性菌:需鈉弧菌CGMCC1.1594、溶藻弧菌CGMCC1.1587、副溶血弧菌ATCC17802、熒光假單胞菌PBPF01169、遲緩愛德華氏菌PBET01170有抗菌活性;5.95mg/mL雞血藤提取浸膏和0.12mg/mL硫酸鏈霉素復(fù)方對藤黃微球菌PBML03134之外的3株革蘭氏陽性菌有抗菌活性,對摩氏摩根菌PBMM02141和銅綠假單胞菌CMCC(B)10104之外的9株革蘭氏陰性菌有抗菌活性,該復(fù)方在比單方低濃度的情況下抗菌譜較各單方廣。雞血藤提取浸膏與硫酸鏈霉素復(fù)方對15株菌的MIC范圍為16.70mg/mL雞血藤提取浸膏+0.39mg/mL硫酸鏈霉素～30.62mg/mL雞血藤提取浸膏+0.72mg/mL硫酸鏈霉素;而對需鈉弧菌CGMCC1.1594、藤黃微球菌PBML03134、摩氏摩根菌PBMM02141、銅綠假單胞菌和大腸埃希氏菌CMCC(B)44102無殺菌活性。對其余10株菌的MBC范圍為20.42mg/mL雞血藤提取浸膏+0.48mg/mL硫酸鏈霉素～30.62mg/mL雞血藤提取浸膏+0.72mg/mL硫酸鏈霉素。采用腹腔注射法建立羅非魚鏈球菌人工感染病害模型,并基于該模型分別考察雞血藤提取浸膏、硫酸鏈霉素、雞血藤提取浸膏與硫酸鏈霉素復(fù)方治療效果。結(jié)果表明:中西藥復(fù)方拌料濃度為5.57g/kg+0.13g/kg(雞血藤提取浸膏+硫酸鏈霉素)時,相對存活率最大為80.56%,而此時5.57g/kg雞血藤提取浸膏和0.13g/kg硫酸鏈霉素的相對存活率分別為52.63%和13.89%,加和值為66.52%,低于復(fù)方相對存活率。雖然雞血藤提取浸膏對羅非魚鏈球菌具有顯著療效,然其使用劑量過大,本文篩出具有協(xié)同抗無乳鏈球菌QH-726活性的雞血藤提取浸膏和硫酸鏈霉素復(fù)方,該復(fù)方可顯著降低雞血藤使用劑量,為開發(fā)安全高效防治羅非魚鏈球菌病新藥做鋪墊,為新型安全高效漁藥的開發(fā)提供新思路。
【圖文】：

圖２片／化NB）的響應(yīng)面圖和等高線圖逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ邋ｓｕｒｆａｃｅｓ邋ａｎｄ邋ｃｏｎｔｏｕｒｓ邋ｏｆ邋Ｙ＝ｆ逡逑通過咚脊分析獲得考察范圍內(nèi)復(fù)方中單方的最優(yōu)配比為４２．５：邋１邋（ｍ：ｍ），在此最逡逑復(fù)配方案下，平行Ｈ次驗證實驗，模型預(yù)測其與陽性對照的相對濃度為１．２４７３，其逡逑實際值為１．２４２１，相對誤差為０．４２％，表明模型顯著可靠，該方法確實可行。逡逑．５邋ＭＩＣ和ＭＢＣ測定結(jié)果逡逑將配制的４６．４０ｍｇ／ｍＬ雞血藤提取浸膏、ｌ．Ｏｍｇ／ｍＬ硫酸鏈霉素、４０．８３ｍｇ／ｍＬ雞血逡逑提取浸膏和0．９６ｍｇ／ｍＬ硫酸鏈霉素復(fù)方作為初始藥液，采用梯度稀釋法稀釋各試樣逡逑始藥液樣品，，按照２．６方法測定各試樣的ＭＩＣ和ＭＢＣ，結(jié)果如表３－７所示，中西藥復(fù)逡逑的ＭＩＣ中雞血藤提取浸膏濃度為５．％ｍｇ／ｍＬ、硫酸鏈霉素為０．１４ｍｇ／ｍ＾均盈著低逡逑單方ＭＩＣ，說明雞血藤提取浸膏與硫酸鏈霉素間存在顯著的協(xié)同抑制無乳鏈球茵活逡逑。逡逑表３－６中西復(fù)方對無乳鏈球菌ＱＨ－７２６的ＭＩＣ與ＭＢＣ逡逑－＊
【學位授予單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S943

【參考文獻】

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本文編號：2702186