【摘要】：DNA條形碼作為一種新興的鑒定技術(shù),能夠打破傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類中的一些局限,輔助形態(tài)學(xué)進(jìn)行物種分類鑒定。自提出以來,在包括珊瑚、腹足類、甲殼動物、魚類、兩棲類及鳥類等多個類群的研究中得到了廣泛應(yīng)用�；贑OⅠ基因的DNA條形碼在動物分類鑒定研究中已經(jīng)獲得了大量認(rèn)可,并逐漸擴(kuò)大到其它基因。DNA條形碼技術(shù)的分類鑒定必須滿足兩個重要標(biāo)準(zhǔn):一是種間遺傳距離與種內(nèi)遺傳距離存在條形碼間隙,即種間遺傳距離是種內(nèi)遺傳距離的10倍及以上;二是種與種之間為單系群。本研究將驗證線粒體COⅠ基因、16S rRNA基因、Cyt b基因在浙江沿海蟹類中進(jìn)行DNA條形碼研究的可行性,并進(jìn)一步探索mini-COⅠ、mini-16S rRNA基因在蟹類中進(jìn)行分類鑒定的有效性及準(zhǔn)確性。本論文的研究內(nèi)容大致分為兩部分:1.分別獲得了6種蟹類的共70個個體的線粒體COⅠ、16S rRNA、Cyt b基因序列,堿基組成具有明顯的AT偏倚性;種內(nèi)平均遺傳距離分別為0.002、0.002、0.003,種間平均遺傳距離為0.130、0.111、0.147,種間平均遺傳距離分別是種內(nèi)平均遺傳距離的65、55.5、49倍,均大于10倍,DNA條形碼片段成功地檢測到條形碼間隙;在分別基于COⅠ、16S rRNA、Cyt b基因構(gòu)成的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹中,各物種均形成單系群,滿足DNA條形碼分類鑒定的兩個重要標(biāo)準(zhǔn)。所以,基于COⅠ基因、16S rRNA基因、Cyt b基因序列的DNA條形碼技術(shù)能夠用于本研究中蟹類的分類鑒定。2.分別測定了6種蟹類的共70個樣品的線粒體mini-COⅠ、mini-16S rRNA基因序列,DNA條形碼堿基含量普遍具有AT偏倚性;基于mini-16 rRNA基因的6種蟹類種內(nèi)平均遺傳距離為0.139,種間平均遺傳距離為0.154,種間平均遺傳距離是種內(nèi)平均遺傳距離的1.1倍,小于10倍,無法檢測到條形碼間隙,不滿足DNA條形碼分類鑒定的第一條標(biāo)準(zhǔn)。所以,mini-16S rRNA基因不適用于本研究中蟹類的分類鑒定�；趍ini-COⅠ基因的6種蟹類種內(nèi)平均遺傳距離為0.004,種間平均遺傳距離為0.365,種間平均遺傳距離是種內(nèi)平均遺傳距離的91倍,大于10倍,符合DNA條形碼分類鑒定的第一條標(biāo)準(zhǔn)。在基于mini-COⅠ基因構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹中,各物種均形成單系群且有較高的支持度,符合DNA條形碼鑒定的第二條標(biāo)準(zhǔn)。這表明mini-COⅠ條形碼在本研究蟹類分類鑒定上也具有一定的有效性和準(zhǔn)確性。
【圖文】：

圖 1-1 DNA 條形碼開發(fā)流程圖Fig 1.1 Process of DNA barcode development1.1.4 DNA 條形碼技術(shù)優(yōu)越性生物表型特征具有一定可塑性，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類方法對物種鑒定時易出現(xiàn)錯誤，而且此方法過于依賴分類學(xué)專家的識別能力，易忽略許多生物類群普遍存在的隱存分類單元，形態(tài)檢索表只能夠與鑒別物種特定發(fā)育階段相對應(yīng)，無法對鑒定物種進(jìn)行精準(zhǔn)地識別，，制約了生物多樣性的研究。與之相比，DNA 條形碼技術(shù)具有如下優(yōu)勢：①對樣品要求低，沒有器官、組織特異性和完整性要求，微克級樣品量、毛發(fā)、甚至某些死亡后的組織等均可提取 DNA；②可以利用生物 DNA 序列的穩(wěn)定性與特異性，避免表型差異引起的鑒別錯誤，能夠有效地鑒別形態(tài)差異微小的物種；③同一個體的DNA 條形碼序列在不同的生長階段不會發(fā)生變化，這能夠克服同一個體不同發(fā)育階段表型差異顯著而引起的誤差，降低了鑒別工作量；④不同類群生物因生存環(huán)境等相似而易出現(xiàn)表型特征相似、趨同進(jìn)化現(xiàn)象，DNA 條形碼技術(shù)能夠克服表型類似，從而鑒別出新種、隱存種，增加鑒定工作的準(zhǔn)確性[13]；⑤DNA 條形碼由四種堿基構(gòu)成，

15圖 2-1 6 種蟹類部分 PCR 產(chǎn)物電泳圖譜.1 Electrophoresis patterns of PCR products in six kinds of00 bp）；1-6：銳齒圀；銹斑圀；日本圀；紅星梭子蟹（A: COⅠ; B: 16S rRNA; C: Cyt b）
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

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