【摘要】：凝集素是可以特異性結(jié)合糖類的模式識別受體,在先天性免疫中發(fā)揮著重要作用。本研究從已構(gòu)建的大黃魚(Larimichthys crocea)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選出兩種凝集素基因,galectin-9和Nattectin-like新型C-型凝集素,分別命名為LcGal-9和LcNTC,并對它們的免疫功能進行了研究,得到的結(jié)果如下:LcGal-9是一種半乳糖凝集素,其cDNA全長1496 bp,開放閱讀框(ORF)978 bp,編碼325個氨基酸。LcGal-9不具有信號肽和跨膜區(qū),含有兩個由短肽相連的CRD結(jié)構(gòu)域,每個CRD均含有兩個保守的糖結(jié)合位點H-NPR和WG-EE-。系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn),LcGal-9與雀鯛(Stegastes partitus)等魚類的galectin-9聚為一支。qRT-PCR分析表明,LcGal-9 mRNA廣泛分布于大黃魚的各種組織,其中在肝臟中的表達量最高。Western blot結(jié)果顯示,肝臟、脾臟、腸道等組織中LcGal-9蛋白的含量豐富,而在肌肉和血漿中沒有檢測到LcGal-9蛋白。PolyI:C刺激后,肝臟、脾臟和頭腎中的LcGal-9 mRNA在多個時相均顯著上調(diào);相反,LPS和副溶血弧菌刺激后,LcGal-9在三種組織中的表達量普遍下調(diào)。刺激隱核蟲感染后,鰓、皮膚、脾臟和頭腎中的LcGal-9在感染初期均明顯升高。體外重組表達的LcGal-9(r LcGal-9)具有不依賴Ca2+的生物學活性,不僅可以凝集人、家兔和大黃魚的紅細胞,對革蘭氏陰性菌溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌也具有凝集作用。α-乳糖和LPS能抑制r LcGal-9的凝血活性。免疫組化結(jié)果表明,PolyI:C和副溶血弧菌刺激后,脾臟中LcGal-9蛋白量增加。以上結(jié)果為研究LcGal-9在大黃魚先天免疫應答中作用提供了依據(jù)。LcNTC屬于C-型凝集素家族,其cDNA全長859 bp,開放閱讀框(ORF)465 bp,編碼154個氨基酸。LcNTC的N端有一個信號肽和一個跨膜區(qū),C端含有一個CRD結(jié)構(gòu)域,其中含有甘露糖結(jié)合位點EPN和四個可形成二硫鍵的保守半胱氨酸。系統(tǒng)分析表明,LcNTC與魚類C-型凝集素和多種Nattectin-like蛋白具有較近的親緣關系。LcNTC mRNA在大黃魚各組織中均有表達,其中鰓中的表達量最高。LPS、PolyI:C和副溶血弧菌刺激后,肝臟、脾臟和頭腎中LcNTC的表達量在不同時相顯著升高。刺激隱核蟲感染后,鰓、皮膚、脾臟和頭腎中LcNTC也呈現(xiàn)出不同程度的上調(diào)。體外重組表達的LcNTC(rLcNTC)具有Ca2+依賴性的凝集活性,可以凝集人、家兔和大黃魚的紅細胞,甘露糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖和LPS對rLcNTC的紅細胞凝集活性均具有抑制作用。此外,rLcNTC對多種革蘭氏陽性菌和陰性菌均表現(xiàn)出較強的凝集效果。上述研究結(jié)果表明,LcNTC可能作為重要的模式識別受體,參與了大黃魚對細菌、病毒和寄生蟲的免疫防御。
【圖文】：

圖 1-1 半乳糖凝集素的分類及糖類識別[40]g. 1-1 Galectin classification and recognition to carbohydrate集素的功能公認的多功能免疫分子，其功能涉及細胞粘附和8]，抗腫瘤免疫應答[49]等。更重要的是，，它可作為病原相關分子模式（PAMPs），參與先天性免疫entrarchus labrax）[51]和牙鲆（Paralichthys olivac免疫功能。從海鰻（Conger myriaster）中分離出[53]。此外，敲除 galectin-1 后斑馬魚（Danio rerio研究結(jié)果均表明，galectin 參與魚類免疫防御與發(fā)素的結(jié)構(gòu)與分類類凝集活性依賴于 Ca2+的凝集素超家族，至少含

圖 1-2 C-型凝集素的空間結(jié)構(gòu)[55]Fig. 1-2 The spatial structure of C-type lectin[5能可參與多種免疫反應，例如病原識別[5]。C-型凝集素以可溶性蛋白和跨膜蛋ing lectin，MBL）即為一種可溶性 C-型BL 含有 6 個 CRD，CRD 末端可識別 位和第 4 位羥基（圖 1-3）。樹突狀細endritic cell-specific intercellular ad巨噬細胞半乳糖型 C 型凝集素（Macr-型凝集素，兩者在病原識別和細胞間信香魚（Plecoglossus altivelis）[65]、半滑舌odon idella）[67]、點帶石斑魚（Epinep集素，并驗證了它們體外抗菌和抗病
【學位授予單位】：集美大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

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1 呂常歡;大黃魚凝集素galectin-9和Nattectin-like的功能研究[D];集美大學;2016年

2 馬洪喜;Galectin-9蛋白在胃癌中的表達及臨床意義[D];吉林大學;2012年

本文編號：2669869