【摘要】：無乳鏈球菌是羅非魚鏈球菌病的主要病原菌之一,是近年來導(dǎo)致廣東和海南等羅非魚主要養(yǎng)殖區(qū)的羅非魚鏈球菌病爆發(fā)的主因,實際生產(chǎn)中羅非魚無乳鏈球菌病常采用抗生素治療,但抗生素治療往往存在藥物殘留和耐藥性等問題,所以探索生物防治羅非魚無乳鏈球菌病是迫在眉睫的,本文意在篩選到一株具有良好無乳鏈球菌拮抗效果,具有一定的胃腸道耐受性,能夠安全使用的芽孢桿菌,并研究該菌株對羅非魚生長、血清指標的影響和對羅非魚無乳鏈球菌病保護率的影響。主要研究結(jié)果如下：1.拮抗芽孢桿菌的篩選本研究通過牛津杯法篩選對羅非魚無乳鏈球菌具有拮抗作用的芽孢桿菌,然后利用16S rDNA測序鑒定篩選到的候選菌株,再通過人工模擬胃腸道耐受性試驗,評價比較各候選菌株的抗逆性,并通過血平板試驗和腹腔注射法測定其對羅安全性非魚的。試驗結(jié)果表明：篩選到4株具有良好無乳鏈球菌拮抗作用的芽孢桿菌,再經(jīng)過耐受性和安全性試驗,綜合考慮確定解淀粉芽孢桿菌J4進行后續(xù)試驗,J4在pH為4.0,3.0,2.0的人工胃液中培養(yǎng)4h后相對存活率分別為94.53%,84.53%,43.24%,在人工腸液培養(yǎng)4h后相對存活率為97.48%,在0.4%的膽鹽濃度中培養(yǎng)4h后相對存活率為91.88%,具有良好的胃腸道抗逆性,同時其安全性試驗證實,其不產(chǎn)生溶血素,且試驗濃度(最高為1×109cfu/mL)的J4對羅非魚安全。2.解淀粉芽孢桿菌J4對羅非魚生長性能和血清指標的影響本研究選取體重20g左右健康無病羅非魚360尾,隨機分成4組,分別為BO組,B1組,B2組和B3組,每組設(shè)置3個重復(fù),每個重復(fù)30尾魚,BO組飼喂基礎(chǔ)日糧,B1組,B2組和B3組分別飼喂往基礎(chǔ)日糧中添加了1×106、1×107和1×108cfu/g飼料的解淀粉芽孢桿菌J4,試驗期為56天,測定羅非魚生長性能相關(guān)指標,同時每14天取一次羅非魚血清樣品,測定血液指標。試驗結(jié)果表明：B2組和B3組與對照組BO比可以顯著提高羅非魚的增重率和特定生長率(P0.05),顯著降低羅非魚的餌料系數(shù)(P0.05),對肝體比和肥滿度影響不顯著(P0.05),同時B1組,B2組和B3組之間的增重率、特定生長率、餌料系數(shù)差異不顯著(P0.05)。B2組和B3組的羅非魚溶菌酶(LSZ)活性都是從14d開始顯著高于對照組BO(P0.05),并分別在42d和28d時達到最大值；對于血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,從14d開始到試驗結(jié)束,B2組和B3組均顯著高于對照組BO(P0.05),分別在42d和28d時達到最大值；而B2組和B3組的血清堿性磷酸酶(AKP)活性從28d開始顯著高于對照組B0(P0.05),并在56d內(nèi)隨著時間的增加而增加；B2組和B3組的血清丙二醛(MDA)含量從14d開始顯著低于對照組BO(P0.05),并都在42d時降到最低值；B2組和B3組的血清過氧化氫酶(CAT)活性與對照組BO差異都不顯著(P0.05)；B2組和B3組之間的各血清指標在各時間點都沒有顯著差異(P0.05)。所以B2組和B3組提高了羅非魚的非特異免疫和抗氧化能力,提高了抗病能力,而B1組的血清LSZ活性、AKP活性、SOD活性、MDA含量和CAT活性與對照組BO相比在各時間點都沒有顯著性差異(P0.05)。3.解淀粉芽孢桿菌J4對羅非魚無乳鏈球菌病保護率的影響本研究把飼喂56天后的BO組,B1組,B2組和B3組羅非魚移動到水族箱中,每組3個重復(fù),每個重復(fù)10尾羅非魚,再以最適無乳鏈球菌攻毒濃度對羅非魚進行腹腔注射,連續(xù)觀察14d,計算相對保護率。試驗結(jié)果表明：B2組和B3相對于對照組B0顯著降低了平均死亡率(P0.05),羅非魚的相對保護率分別為66.67%和75%,B2和B3組的平均死亡率沒有顯著性差(P0.05),但B3組相對于B2組推遲了羅非魚死亡時間,B1組平均死亡率和對照組B0沒有顯著差異(P0.05),相對保護率僅為8.33%。
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S943

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