【摘要】：至今為止,已經(jīng)有大量的研究致力于探索尼羅羅非魚在鹽度應(yīng)激條件下生理生化水平的變化,但是從免疫學的角度揭示鹽度應(yīng)激對其產(chǎn)生的影響的研究還十分有限。高滲條件下,有關(guān)魚類免疫器官在組織學和轉(zhuǎn)錄組學等方面的應(yīng)激應(yīng)答反應(yīng)的報道較少。本實驗首先探究了,長期鹽度應(yīng)激對尼羅羅非魚的兩種免疫器官(脾臟和頭腎)的影響,進行了為期八周的養(yǎng)殖實驗,以淡水為對照組,評估了長期鹽度應(yīng)激(16psu)對尼羅羅非魚的生長性能、血液免疫指標,以及對兩種免疫器官(脾臟和頭腎)在組織學及轉(zhuǎn)錄組學的影響。結(jié)果顯示,淡水組和鹽度應(yīng)激組,尼羅羅非魚的增重和特定生長率皆無顯著差異。但鹽度應(yīng)激(16psu)會引起充血性脾腫大,且血小板和凝血相關(guān)的因子在尼羅羅非魚表達顯著減少,紅細胞分布寬度變異系數(shù)和平均紅細胞血紅蛋白顯著增加。同時,在尼羅羅非魚脾臟和頭腎的組織切片中,觀察到大量巨噬細胞中心和色素沉積。透射電鏡的結(jié)果顯示,鹽度應(yīng)激(16psu)組同對照組相比,其脾臟和頭腎中有更多含有沉積顆粒的異常巨噬細胞和中性粒細胞。在轉(zhuǎn)錄組學方面,在脾臟和頭腎中,分別有772和502個基因被標注為顯著差異表達,分別對應(yīng)5個和1個能顯著改變免疫系統(tǒng)的通路,且鹽度應(yīng)激(16psu)組脾臟補體通路顯著下調(diào)。本研究表明,長期暴露于高滲透環(huán)境下的尼羅羅非魚可誘發(fā)脾腫大,同時凝血功能降低,增強了脾臟的吞噬活性和降低補體通路。隨后,為了進一步探究了鹽度應(yīng)激下,營養(yǎng)物質(zhì)β-葡聚糖的免疫營養(yǎng)調(diào)控作用,設(shè)計了后續(xù)實驗,從生長、組織學、血液學、免疫和生長因子的表達和腸道微生物方面評估了飼料中β-葡聚糖緩解鹽度應(yīng)激對尼羅羅非魚免疫器官損傷的作用。實驗配制了三種等氮等能的β-葡聚糖飼料,添加水平分別為0%(基礎(chǔ)飼料)、0.2%和0.4%,飽食投喂,以基礎(chǔ)飼料-淡水組與基礎(chǔ)飼料-鹽度應(yīng)激組(16psu)的尼羅羅非魚為對照,養(yǎng)殖周期為8周。結(jié)果顯示,鹽度應(yīng)激下,不同添加水平的β-葡聚糖,其生長存活皆高于未添加組,與投喂基礎(chǔ)飼料的淡水組的生長存活相比無顯著差異。高鹽度應(yīng)激下,羅非魚脾臟出現(xiàn)腫大現(xiàn)象,脾臟系數(shù)升高(P0.05),脾臟內(nèi)紅細胞顯著增多,0.2%的β-葡聚糖有緩解脾腫大作用,脾臟系數(shù)顯著降低,并與淡水基礎(chǔ)飼料組的脾臟系數(shù)無顯著差異。高鹽度應(yīng)激下,腸道組織出現(xiàn)破壞現(xiàn)象,中腸的小腸絨毛有破碎,杯狀細胞少,而不同添加水平的β-葡聚糖添加組,腸絨毛無破碎,杯狀細胞多,小腸絨毛長,腸絨毛排列緊密,同淡水組腸道組織完整性類似。血液學方面,鹽度應(yīng)激下,血液中紅細胞RBC、白細胞WBC、血球壓積HCT、平均血紅細胞血紅蛋白濃度MCHC、紅細胞分布寬度變異系數(shù)RDW、血小板數(shù)目PLT和血小板壓積PCT與淡水組相比皆升高,而飼料中添加β-葡聚糖顯著降低這些血液指標。同時,隨著鹽度應(yīng)激對羅非魚生長和組織學結(jié)構(gòu)的影響,免疫和生長因子也發(fā)生相應(yīng)的變化,變化如下:脾臟內(nèi),鹽度應(yīng)激組的巨噬細胞遷移抑制因子MIF-2、轉(zhuǎn)化生子因子TGF-β1、TNF-α和IL-1的表達升高;而飼料中添加β-葡聚糖能顯著降低MIF-2、TGF-β1、TNF-α表達,而顯著增加IL-1的表達。在腸道內(nèi),飼料中添加β-葡聚糖能顯著降低鹽度應(yīng)激條件下的MIF-2和IL-1β的表達,升高TNF-α的表達,鹽度應(yīng)激下,添加0.4%β-葡聚糖組TGF-β1也顯著升高。頭腎中,飼料中添加β-葡聚糖能顯著增加鹽度應(yīng)激條件下的TNF-α的表達(P0.05),0.4%β-葡聚糖能顯著降低鹽度應(yīng)激條件下的IL-1的表達(P0.05)。腸道菌群作為一種評價健康的指標,為羅非魚免疫研究提供了新方向。結(jié)果顯示:鹽度應(yīng)激能改變腸道菌群結(jié)構(gòu)與豐富度。鹽度應(yīng)激,屬水平下,一些致病菌豐度增加,如:韋榮球菌屬(Veillonella)、海洋放線菌(Rubrobacter)和暖繩菌(Caldlinea)。一些應(yīng)激壓力應(yīng)激的菌也顯著增加,如Gracilibacter菌和Perlucidibaca菌。而一些優(yōu)勢內(nèi)源菌豐度卻顯著降低,如不動桿菌(Acinetobacter)。飼料中添加不同濃度的β-葡聚糖能顯著改善菌群結(jié)構(gòu),一些條件致病菌顯著降低,如:假單胞菌(Pseudomonas)、Staphylococcus菌、鏈球菌(Streptococcus)、假單胞菌(Pseudomonas)、棒狀桿菌(Corynebacterium);—些拮抗細菌顯著增加,獨島氏菌(Dokdonella)、棲熱菌(Thermus)、Sphingopyxis菌和嗜鹽細菌(Salinicoccus)也顯著增加。
【圖文】：

紅色部分為紅細胞，羅非魚鹽度應(yīng)激組對比淡水組的脾紅細胞增多（圖逡逑２．３ａ，Ｃ）。鹽度應(yīng)激組羅非魚脾臟還現(xiàn)出了明顯的巨噬細胞和大量黑色巨噬細胞中逡逑心（圖２．３ｂ，，Ｄ）。鹽度應(yīng)激組比淡水組，羅

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