【摘要】：黑鯛是一種廣鹽性海產(chǎn)魚,因其肉質(zhì)鮮美抗病抗逆性強(qiáng),現(xiàn)已成為我國海水養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚種之一。目前關(guān)于黑鯛鹽度方面的研究主要集中于黑鯛仔、稚魚在不同鹽度下的存活、黑鯛低鹽度池塘養(yǎng)殖等等宏觀層面,對于黑鯛雜交育種方面的研究也有相關(guān)成功報道,并且有些雜交子代也表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢性狀,但關(guān)于黑鯛與真鯛雜交子代脂肪酸含量及成分有何優(yōu)勢還鮮有研究。本論文以黑鯛為實驗對象,探究黑鯛在不同鹽度處理下4種抗氧化酶活情況以及2個SOD基因和蛋白的表達(dá)情況,并對于黑鯛和真鯛及其正、反交子代的脂肪酸含量及成分進(jìn)行比較分析,主要研究結(jié)果如下:(1)不同鹽度下黑鯛抗氧化酶活及SOD基因和蛋白的表達(dá)情況通過對不同鹽度(5、15、25、35和45鹽度)處理下的黑鯛3種組織(肝臟、鰓和腎臟)進(jìn)行超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶(Glutathion S-transferases,GST)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidases,GPX)4種抗氧化酶活以及SOD蛋白進(jìn)行時序表達(dá)分析。結(jié)果表明,黑鯛的四種抗氧化酶的酶活和SOD蛋白的表達(dá)量在不同鹽度處理組中均有不同程度的變化,其中肝臟和鰓中的高鹽組(鹽度35、45)酶活與蛋白的表達(dá)量受鹽度刺激變化要大于低鹽組(鹽度5、15)。并且對于鹽度的應(yīng)激反應(yīng)多出現(xiàn)在6h和12h。自然海水(鹽度25)中各時間段內(nèi)抗氧化酶活力也有小幅度的變化,但總體而言比較穩(wěn)定。此外,為進(jìn)一步探究鹽度對SOD基因的表達(dá)影響,綜合上述實驗結(jié)果選擇不同鹽度(鹽度5、15和35)處理下的黑鯛3種組織(肝臟、鰓和腎臟)進(jìn)行SOD、CAT、GPX和GST這4種抗氧化酶活和SOD基因進(jìn)行時序表達(dá)模式分析。結(jié)果表明,黑鯛的4種抗氧化酶活和SOD基因的表達(dá)量并不一致,黑鯛4種抗氧化酶活力和SOD蛋白均表現(xiàn)出在高鹽組受鹽度影響而變化顯著,而SOD基因的表達(dá)卻表現(xiàn)出在低鹽(鹽度15)表達(dá)量顯著高于其他實驗組,且鹽度過高(鹽度35)或過低(鹽度5)時CuZnSOD和MnSOD基因表達(dá)量變化不顯著,甚至略有抑制。本研究對黑鯛不同鹽度下抗氧化性的研究表明,黑鯛對鹽度具有很強(qiáng)的耐受性,其中對低鹽耐受性強(qiáng)于高鹽組,在受到鹽度刺激時抗氧化酶活基本在24h內(nèi)能夠通過自身調(diào)節(jié)恢復(fù)正常生存水平,但是對于SOD基因和蛋白造成的表達(dá)量上調(diào)或下降在120h以內(nèi)并未恢復(fù)至正常水平。這對于鹽度與抗氧化性能之間關(guān)系的研究提供了一定的參考資料也為黑鯛的低鹽度池塘養(yǎng)殖提供了一定的理論依據(jù)。(2)黑鯛與真鯛及其正、反交子代粗脂肪含量及脂肪酸成分分析本研究采用索氏抽提法對黑鯛、真鯛及其正交、反交子代4種鯛魚的肝臟、肌肉和魚骨3種組織的粗脂肪和脂肪酸含量分別進(jìn)行了測定,并利用氣相色譜法對其脂肪酸的具體成分進(jìn)行分析。實驗結(jié)果表明,正、反交子代均良好地繼承了親本真鯛的優(yōu)勢,脂肪含量明顯高于親本黑鯛,且以肝臟中最為顯著。雜交后代與親代的飽和脂肪酸成分組成情況基本吻合,并且在雜交后代中檢測到了 C22:0、C24:0等幾種親代脂肪酸成分中未檢測到的脂肪酸,說明雜交后代脂肪酸組成更豐富。雜交后代的不飽和脂肪酸組成與黑鯛親本基本相同,尤其體現(xiàn)在肝臟組成上。雜交后代的這一優(yōu)勢性狀對于黑鯛的雜交育種和子代的養(yǎng)殖推廣提供了一定的理論依據(jù)。本論文結(jié)果為進(jìn)一步了解不同鹽度對黑鯛抗氧化分子調(diào)控機(jī)理提供一定的理論依據(jù),并為黑鯛適宜養(yǎng)殖環(huán)境的選擇和雜交黑鯛的養(yǎng)殖推廣提供一定的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

將超氧陰離子自由基快速歧化為過氧化氫和分子氧；過氧化氫在過氧化氫酶、逡逑谷胱甘肽過氧化物酶和谷胱甘肽過氧化物轉(zhuǎn)移酶的共同作用下轉(zhuǎn)化為水和分子逡逑氧。目前關(guān)于魚類抗氧化系統(tǒng)的氧化應(yīng)激通路己有較深入認(rèn)識（圖１－１）邋［２５］，但逡逑對于不同魚種的氧化應(yīng)激反應(yīng)差異還了解較少。逡逑超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是生物體內(nèi)最主要的一類抗氧化物酶，構(gòu)成了機(jī)體逡逑免疫防御系統(tǒng)的首道防線。通過催化作用，使超氧陰離子分解為0２和Ｈ２０２來消逡逑除因外界刺激而產(chǎn)生的過多的氧自由基（ＲＯＳ），使生物體免受損傷。１９３８年逡逑Ｍａｎｎ邋＆邋Ｋｅｉｌｉｎ邋［２６］首次從牛紅細(xì)胞中分離出一種藍(lán)色的含銅蛋白質(zhì)逡逑（Ｈｅｍｏｃｕｐｒｅｉｎ），１９６９年Ｍｃｃｏｒｄ等［２７］發(fā)現(xiàn)該蛋白具有催化超氧化物陰離子的逡逑功能，并能使超氧化物陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，，故將此酶命名為超氧化物歧化酶逡逑（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ邋Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）。ＳＯＤ是一類清除自由基的蛋白酶，對需氧生物的生逡逑存起著重要的作用，是生物體防御氧毒性的關(guān)鍵。Ｗｉｎｓｔｏｎ等［２８］的研宄發(fā)現(xiàn)，當(dāng)逡逑２逡逑

逑２．４．２不同鹽度對黑期ＳＯＤ蛋白的影響逡逑如圖２－３所示，黑鯛在受到低鹽度脅迫時，低鹽度組５和１５的ＣｕＺｕＳＯＤ逡逑和ＭｎＳＯＤ蛋白的相對表達(dá)量變化并不完全一致。圖２－３Ａ所示，低鹽度組的鹽逡逑度５和鹽度１５處理下魚體肝臟中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白分別在１２ｈ和６ｈ蛋白表達(dá)顯逡逑著下降，到１２０邋ｈ鹽度１５時處理組ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白表達(dá)仍顯著低于對照組，逡逑ＭｎＳＯＤ蛋白在低鹽度組鹽度５和鹽度１５時蛋白表達(dá)量均有增加，且在１２０邋ｈ仍逡逑顯著高于對照組。圖２－３Ｂ所示，鰓中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白在低鹽度組鹽度５時蛋白逡逑表達(dá)量在６邋ｈ顯著增加，１２邋ｈ又顯著減少直至１２０邋ｈ仍顯著低于對照組，而低鹽逡逑度組鹽度１５時在６邋ｈ和１２邋ｈ邋ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白表達(dá)量顯著下降，但于１２０邋ｈ又增加逡逑至與對照組表達(dá)量相當(dāng)。ＭｎＳＯＤ蛋白在低鹽度組鹽度５和鹽度１５時蛋白表達(dá)逡逑量在６ｈ和１２邋ｈ均顯著減少，于１２０邋ｈ又增加且顯著高于對照組。圖２－３Ｃ所示，逡逑腎臟中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白在低鹽度組鹽度５時蛋白表達(dá)量均顯著增加
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2631855