干旱、鹽、低溫等非生物脅迫以及病原菌、昆蟲等生物脅迫嚴重威脅著植物的生存以及糧食的產(chǎn)出,直接威脅著人類的生存。本論文以超強抗寒白菜型冬油菜新品種隴油6號和抗寒較弱品種天油2號兩種白菜型油菜為實驗材料,通過實時熒光定量PCR(RT-RCR)技術(shù)研究非生物脅迫對白菜型油菜Rboh基因家族中RbohC/F基因表達的影響、活性氧的積累以及抗氧化酶活性的影響,并分析白菜型油菜RbohC/尸基因、活性氧、抗氧化酶活性同MAP激酶級聯(lián)途徑之間的調(diào)控關(guān)系,并為植物抗逆研究提供一定的理論依據(jù)。實驗結(jié)果如下:1、白菜型油菜隴油6號和天油2號不同組織經(jīng)實時熒光定量PCR(RT-PCR)顯示,白菜型油菜RbohC/F基因在隴油6號和天油2號根、莖、葉及下胚軸中均有表達,說明RbohC/F基因在不同組織中的表達為組成型表達且存在差異。經(jīng)低溫(4℃)、鹽、干旱、H2O2及ABA脅迫后,兩種白菜型油菜中RbohC/F基因表達均受到誘導。隨冷脅迫時間延長、鹽濃度的升高、外源H202濃度的升高,白菜型油菜RbohC/F基因的表達量均呈先升后降的趨勢;隨PEG-6000濃度的增大,白菜型油菜RbohC/F基因的表達量呈上...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 緒論
    1.1 活性氧的調(diào)控機制:產(chǎn)生與清除
        1.1.1 活性氧的產(chǎn)生
        1.1.2 活性氧的清除
            1.1.2.1 活性氧(ROS)的清除機制—非酶系統(tǒng)
            1.1.2.2 活性氧(ROS)的清除機制—酶系統(tǒng)
    1.2 活性氧(ROS)在信號傳導中的作用
        1.2.1 活性氧(ROS)調(diào)控細胞增殖
        1.2.2 活性氧(ROS)參與調(diào)控細胞PCD過程
        1.2.3 活性氧(ROS)參與植物獲得性免疫
    1.3 活性氧(ROS)與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路
    1.4 NADPH氧化酶簡述
    1.5 NADPH氧化酶活性調(diào)控
        1.5.1 鈣離子、磷酸化協(xié)同調(diào)控NADPH氧化酶活性
        1.5.2 脫落酸(ABA)與NADPH氧化酶活性調(diào)節(jié)
        1.5.3 蛋白之間的相互作用調(diào)控NADPH氧化酶的活性
    1.6 MAP激酶級聯(lián)途徑與NADPH氧化酶活性調(diào)節(jié)
    1.7 本研究的目的及意義
第二部分 實驗材料與實驗方法
    2.1 實驗材料的培養(yǎng)與處理
        2.1.1 實驗材料的培養(yǎng)
        2.1.2 材料處理
    2.2 實驗方法
        2.2.1 白菜型油菜RbohC、 RbohF基因CDS區(qū)克隆
            2.2.1.1 油菜葉片總RNA的提取
            2.2.1.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的第一條鏈
            2.2.1.3 油菜RbohC、 RbohF基因CDS區(qū)的克隆
            2.2.1.4 目的基因回收
            2.2.1.5 構(gòu)建重組載體
            2.2.1.6 重組載體的鑒定
            2.2.1.7 菌株與載體
        2.2.2 白菜型油菜RbohC、RbohF基因表達分析
            2.2.2.1 白菜型油菜RbohC、RbohF在不同組織的表達
            2.2.2.2 不同脅迫下白菜型油菜RbohC、RbohF的表達
        2.2.3 鹽、干旱脅迫下抗氧化酶活性及H₂O₂含量的測定
            2.2.3.1 材料的處理
            2.2.3.2 抗氧化酶活性的測定
            2.2.3.3 H₂O₂含量的測定
        2.2.4 NBT、DAB染色
    2.3 藥品及試劑
    2.4 儀器設(shè)備
    2.5 PCR擴增及定量引物
    2.6 數(shù)據(jù)分析
第三部分 實驗結(jié)果與分析
    3.1 RbohC、RbohF基因CDS區(qū)克隆
        3.1.1 白菜型油菜總RNA的提取
        3.1.2 白菜型油菜RbohC、RbohF基因CDS克隆
    3.2 油菜RbohC、RbohF基因的表達
        3.2.1 油菜RbohC、RbohF基因在不同組織的表達
        3.2.2 油菜RbohC、RbohF基因在逆境脅迫下的表達分析
            3.2.2.1 不同逆境下RbohC、RbohF基因的表達分析
        3.2.3 不同抑制劑對RbohC、RbohF基因表達的影響
        3.2.4 抑制劑預處理再逆境脅迫對RbohC、RbohF基因表達的影響
    3.3 鹽及干旱脅迫對活性氧的影響
        3.3.1 鹽脅迫對兩種油菜H₂O₂和O2
-的影響
        3.3.2 干旱脅迫對兩種油菜H₂O₂和O2
-的影響
        3.3.3 不同抑制劑對活性氧的影響
        3.3.4 不同抑制劑預處理后鹽及干旱脅迫對H₂O₂的影響
    3.4 逆境脅迫對抗氧化酶活性的影響
        3.4.1 鹽脅迫對兩種油菜抗氧化酶活性的影響
        3.4.2 干旱脅迫對兩種油菜抗氧化酶活性的影響
        3.4.3 抑制劑對抗氧化酶活性的影響
        3.4.4 抑制劑預處理后經(jīng)鹽和干旱脅迫對抗氧化酶活性的影響
第四部分 討論
    4.1 油菜RbohC及RbohF基因在不同組織的表達
    4.2 MAP激酶級聯(lián)途徑參與調(diào)控逆境下油菜RbohC及RbohF基因的表達
    4.3 MAP激酶級聯(lián)途徑參與活性氧(ROS)的調(diào)節(jié)
    4.4 MAP激酶級聯(lián)途徑參與Rboh基因表達的調(diào)節(jié)
第五部分 結(jié)論
參考文獻
碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3873816

suoshi