棉花是我國(guó)天然纖維的重要來源之一,同時(shí)也是作為鹽堿地改良的先鋒作物。從分子生物學(xué)水平開展棉花耐鹽機(jī)理的研究,利用基因工程手段快速提高棉花品種的耐鹽性,對(duì)于充分利用我國(guó)大面積的鹽堿地資源以及解決糧棉爭(zhēng)地問題有著重要的作用。質(zhì)子泵焦磷酸水解酶(VP)是生物體內(nèi)一種重要的質(zhì)子泵,能夠水解焦磷酸釋放能量,在調(diào)節(jié)細(xì)胞膨壓,膜內(nèi)外電勢(shì)差以及胞內(nèi)小分子的主動(dòng)運(yùn)輸過程中發(fā)揮重要的作用。植物在受到鹽脅迫作用時(shí),VP能夠?yàn)橐号萏峁┠芰糠e累無機(jī)離子和其他溶質(zhì),提高植物的耐鹽性。本研究參考AD基因組數(shù)據(jù),對(duì)陸地棉VP基因家族進(jìn)行了鑒定分析。利用陸地棉材料中9807,成功克隆GhVP1基因,并結(jié)合RNAi技術(shù)和VIGS技術(shù),成功構(gòu)建干擾載體和VIGS載體,對(duì)GhVP1基因的功能展開分析,主要研究結(jié)果如下:1.比較系統(tǒng)地分析了陸地棉AD基因組VP基因家族。以GhVP基因(Gene Bank No.:ADN96173.1)為參考序列,參考棉花四倍體(AD組)基因組信息,篩選鑒定獲得13個(gè)VP基因家族成員(GhVP1-GhVP13)。分析表明,長(zhǎng)期進(jìn)化過程里,不同物種間基因結(jié)構(gòu)有一定的變化,但相同物種間仍保留大部分結(jié)...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 棉花耐鹽方面的研究
        1.1.1 耐鹽性研究的重要性
        1.1.2 鹽脅迫對(duì)棉花的影響
        1.1.3 棉花耐鹽基因研究
    1.2 VP基因的研究進(jìn)展
    1.3 VIGS研究進(jìn)展
        1.3.1 VIGS技術(shù)原理
        1.3.2 VIGS載體的構(gòu)建
        1.3.3 VIGS的效率和應(yīng)用
    1.4 RNAi研究進(jìn)展
        1.4.1 RNAi作用機(jī)制及特點(diǎn)
        1.4.2 RNAi技術(shù)應(yīng)用
    1.5 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        1.5.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)和方法
        1.5.2 棉花轉(zhuǎn)基因現(xiàn)狀
    1.6 立題依據(jù)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株與載體質(zhì)粒
        2.1.3 引物、酶、與試劑盒
        2.1.4 培養(yǎng)基、抗生素的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 材料處理方法
        2.2.2 陸地棉VP基因家族分析
        2.2.3 GhVP基因目的片段的獲得
        2.2.4 RNAi載體的構(gòu)建
        2.2.5 VIGS載體的構(gòu)建
        2.2.6 RNAi載體花絮法轉(zhuǎn)化擬南芥
        2.2.7 VIGS載體浸染棉花
        2.2.8 RNA的提取
    2.3 轉(zhuǎn)GhVP1基因棉花的檢測(cè)
        2.3.1 DNA的提取
        2.3.2 轉(zhuǎn)基因分子檢測(cè)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 VP基因家族的全基因組鑒定和分析
        3.1.1 GhVP基因家族成員的鑒定
        3.1.2 VP基因家族蛋白結(jié)構(gòu)域和motif分析
        3.1.3 GhVP基因家族的基因結(jié)構(gòu)分析
        3.1.4 VP基因家族的進(jìn)化分析
    3.2 GhVP的功能分析
        3.2.1 GhVP在擬南芥中的功能分析
        3.2.2 GhVP在棉花中的功能分析
    3.3 轉(zhuǎn)GhVP1基因棉花分子檢測(cè)
第四章 討論
    4.1 陸地棉VP基因家族的討論
    4.2 VP基因的討論
    4.3 棉花轉(zhuǎn)基因檢測(cè)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3810648