植物油脂是植物體內(nèi)三大營養(yǎng)物質(zhì)之一,也是人類最重要的油脂來源。課題組前期研究了WRINKLED1（WRI1）對陸地棉（Gossypium hirsutum L.）種子油脂含量的影響,結(jié)果表明上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子GhWRI1的表達使T0代陸地棉種子油脂含量降低,這與擬南芥WRI1報道的結(jié)果相反。為明確轉(zhuǎn)錄因子GhWRI1在陸地棉中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能,GhWRI1不同結(jié)構(gòu)域?qū)硕ㄎ弧⑥D(zhuǎn)錄激活及結(jié)合順式作用元件的影響,本研究首先測定了陸地棉GhWRI1轉(zhuǎn)基因T3代植株各組織的油脂及可溶性糖含量;其次,通過GhWRI1蛋白結(jié)構(gòu)域的預測,利用5′端、3′端刪除法及點突變法獲得了含不同結(jié)構(gòu)域的突變基因;此外,利用無縫克隆的方法構(gòu)建了一系列表達載體,并通過煙草瞬時表達系統(tǒng)、酵母雙雜交系統(tǒng)及雙熒光素酶檢測系統(tǒng),分別評估了GhWRI1各個結(jié)構(gòu)域?qū)ζ涔δ艿挠绊�。主要結(jié)果如下:1、GhWRI1能夠調(diào)控棉花葉片、胚珠及纖維中碳的再分配為鑒定GhWRI1在陸地棉中的功能,本研究利用Quantitative Real-Time PCR篩選了高表達GhWRI1基因的轉(zhuǎn)基因植株,并測定了上調(diào)表達GhWRI1 T3代轉(zhuǎn)基因陸地棉葉... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 棉花
    1.2 三酰甘油及其代謝途徑
        1.2.1 三酰甘油簡介
        1.2.2 三酰甘油的生物合成
        1.2.3 三酰甘油的儲存
    1.3 WRI1基因研究現(xiàn)狀
        1.3.1 WRINKLED1基因的發(fā)現(xiàn)及結(jié)構(gòu)特征
        1.3.2 WRINKLED1的功能研究
    1.4 轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄因子簡介
        1.4.2 AP2（APETALA2）/EREBP超家族轉(zhuǎn)錄因子
第二章 引言
    2.1 立題依據(jù)
    2.2 技術路線
第三章 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和載體
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 常用試劑配制濃度和主要培養(yǎng)基
    3.2 實驗方法
        3.2.1 大腸桿菌轉(zhuǎn)化
        3.2.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞制備及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.2.3 酵母菌感受態(tài)細胞的制備及酵母轉(zhuǎn)化
        3.2.4 質(zhì)粒DNA提取
        3.2.5 DNA片段回收
        3.2.6 無縫克隆技術
        3.2.7 酵母雙雜交載體構(gòu)建
        3.2.8 煙草瞬時表達載體構(gòu)建
        3.2.9 農(nóng)桿菌介導煙草葉片下表皮細胞瞬時表達
        3.2.10 植物RNA提取
        3.2.11 反轉(zhuǎn)錄操作
        3.2.12 基因的表達分析
        3.2.13 植物含油量測定
        3.2.14 植物可溶性糖的提取與測定
        3.2.15 GhWRI1生物信息學分析
        3.2.16 雙熒光素酶檢測系統(tǒng)
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 上調(diào)GhWRI1的表達影響陸地棉各組織中碳的代謝
        4.1.1 GhWRI1基因在陸地棉中的表達特征
        4.1.2 上調(diào)GhWRI1表達的轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        4.1.3 GhWRI1轉(zhuǎn)基因株系與野生型株系各組織脂質(zhì)含量比較
        4.1.4 超量表達GhWRI1對陸地棉各組織糖代謝的影響
    4.2 GhWRI1結(jié)構(gòu)域與其功能關系的研究
        4.2.1 GhWRI1結(jié)構(gòu)域及核定位信號生物信息學分析
        4.2.2 影響GhWRI1細胞核定位的結(jié)構(gòu)特點
        4.2.3 影響GhWRI1轉(zhuǎn)錄激活的結(jié)構(gòu)域鑒定
        4.2.4 GhWRI1蛋白AP2結(jié)構(gòu)域功能驗證
第五章 討論
    5.1 GhWRI1在陸地棉中的表達可調(diào)控陸地棉各組織C流的再分配
    5.2 陸地棉GhWRI1蛋白的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域位于C末端，共含有55個氨基酸
    5.3 陸地棉GhWRI1的AP2結(jié)構(gòu)域影響該蛋白的功能
第六章 結(jié)論
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
    附錄一 縮略詞
    附錄二 主要引物序列
    附錄三 碩士期間參與課題及科研成果
        一 參與課題
        二 科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]擬南芥轉(zhuǎn)錄激活因子AtWRI1研究進展[J]. 楊先友,黃有軍,張通,黃春穎.  生物技術通報. 2016(06)
[2]BnWRI1 coordinates fatty acid biosynthesis and photosynthesis pathways during oil accumulation in rapeseed[J]. Xue-Long Wu,Zhi-Hong Liu,Zhang-Hua Hu,Rui-Zhi Huang.  Journal of Integrative Plant Biology. 2014(06)
[3]植物含油量相關轉(zhuǎn)錄因子WRINKLED1的研究進展[J]. 黃勝和,丁永紅,李東明,陳春香,鐘小菊,饒澤昌.  生命科學. 2012(03)
[4]Oil Body Biogenesis during Brassica napus Embryogenesis[J]. Yu-Qing He and Yan Wu (Key Laboratory of Ministry of Education for Plant Developmental Biology, College of Life Science, Wuhan University, Wuhan 430072, China).  Journal of Integrative Plant Biology. 2009(08)
[5]一類植物中特有的轉(zhuǎn)錄因子——AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子家族[J]. 謝永麗.  青海師范大學學報(自然科學版). 2006(03)
[6]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與調(diào)控作用[J]. 劉強,張貴友,陳受宜.  科學通報. 2000(14)
[7]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 陳麗.  植物生理學通訊. 1997(06)

碩士論文
[1]陸地棉纖維次生壁加厚期正向消減文庫的構(gòu)建及差異表達基因分析[D]. 王少干.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
[2]新疆棉副產(chǎn)品的主要成分的提取分析研究[D]. 田小紅.新疆大學 2012



本文編號：3563682