【目的】建立水稻葉片蛋白的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)譜絕對(duì)定量方法�！痉椒ā克救~片蛋白經(jīng)含1.0%十二烷基硫酸鈉（SDS）的磷酸鹽（PBS）緩沖液提取,丙酮沉淀除雜純化、胰蛋白酶消化,酶解液經(jīng)液相色譜分離,MRM質(zhì)譜監(jiān)測(cè),外標(biāo)法定量�！窘Y(jié)果】向提取緩沖液中加入1.0%SDS可增強(qiáng)水稻葉片中16種靶蛋白和總蛋白質(zhì)的提取效果;不同有機(jī)試劑處理,總蛋白質(zhì)沉淀量存在顯著差異（P<0.05）,沉淀能力從強(qiáng)到弱依次為乙腈>丙酮>異丙醇>甲醇>乙醇;對(duì)于16種目標(biāo)蛋白,總體以丙酮沉淀效果最好,其次是異丙醇和乙腈,甲醇和乙醇效果較差。該方法線(xiàn)性范圍均達(dá)到3個(gè)數(shù)量級(jí),定量限為0.1～2.5 nmol/L,灌漿期16種水稻葉片蛋白質(zhì)含量為6.0～2818.1μg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于14%。【結(jié)論】SDS可顯著提高水稻葉片蛋白提取效果,采用丙酮或乙腈可獲得較好的蛋白沉淀效果,但不同蛋白質(zhì)略有差異。結(jié)合MRM質(zhì)譜監(jiān)測(cè)技術(shù)可實(shí)現(xiàn)水稻葉片蛋白的絕對(duì)定量,方法線(xiàn)性范圍寬、敏度高、重復(fù)性好。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)水稻科學(xué). 2020,34(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

16種特征肽段的總離子流

Bereman等[13]研究表明，過(guò)高濃度的SDS會(huì)抑制胰蛋白酶活性，干擾RPLC的分離和MS分析。因此，SDS殘留量可作為粗蛋白沉淀除雜的一項(xiàng)重要指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用上述5種有機(jī)試劑對(duì)SDS的去除率均可達(dá)94.2%以上，均能保證樣品中SDS濃度低于0.01%，符合HPLC和LC/MS分析條件[21]。綜上，實(shí)驗(yàn)選擇丙酮作為16種目標(biāo)蛋白的沉淀劑。圖3 五種有機(jī)試劑對(duì)16種水稻葉片蛋白沉淀效果比較

五種有機(jī)試劑對(duì)16種水稻葉片蛋白沉淀效果比較


本文編號(hào)：3464514