促分裂原活化蛋白質(zhì)激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）在真核生物中高度保守,在水稻逆境應(yīng)答反應(yīng)中也發(fā)揮著重要作用。本研究表達(dá)純化了水稻OsMPK17蛋白質(zhì),制備了特異性抗體,對多種非生物逆境脅迫下的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行免疫印跡分析,發(fā)現(xiàn)OsMPK17蛋白質(zhì)在干旱脅迫下誘導(dǎo)表達(dá),提示該蛋白質(zhì)在干旱脅迫應(yīng)答中發(fā)揮作用。對脫落酸和茉莉酸甲酯處理的離體葉片蛋白質(zhì)分析發(fā)現(xiàn),OsMPK17蛋白質(zhì)表達(dá)豐度下降,提示該蛋白質(zhì)的功能發(fā)揮可能受激素調(diào)控。為此,構(gòu)建了過表達(dá)OsMPK17蛋白質(zhì)的載體,轉(zhuǎn)化水稻后篩選獲得了OsMPK17蛋白質(zhì)過表達(dá)的純合株系。田間種植鑒定結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因株系的株高變矮、穗長變短、結(jié)實(shí)率降低。種子萌發(fā)期擬旱（PEG-6000）處理?xiàng)l件下,過表達(dá)OsMPK17株系的種子長勢明顯比野生型好,根長與芽長均顯著大于野生型。幼苗期失水試驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)基因植株的失水率低于野生型。在土培干旱脅迫后恢復(fù)澆水的試驗(yàn)中,過表達(dá)OsMPK17蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因水稻生長也好于野生型。綜上,過表達(dá)OsMPK17蛋白質(zhì)提高了水稻的耐旱性。本研究增進(jìn)了對水稻OsMPK17基... 

【文章來源】：作物學(xué)報(bào). 2020,46(01)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

水稻OsMPK17基因的克隆與融合蛋白質(zhì)表達(dá)

設(shè)計(jì)PCR引物,以cDNA質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增獲得了全長的OsMPK17基因(圖3-A),雙酶切后裝入pEASY-3HA中間載體,測序驗(yàn)證后,用內(nèi)切酶Hind III和Xba I切下片段,電泳檢測到1848 bp的插入片段(圖3-B),裝入水稻轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pUBI-C4300中,獲得了pUBI-C4300-MPK17轉(zhuǎn)化載體,經(jīng)Kpn I和Sac I酶切檢測到符合預(yù)期的插入片段(圖3-C),證明獲得了正確的過表達(dá)載體。2.4 水稻轉(zhuǎn)化及陽性植株的鑒定

為了進(jìn)一步鑒定轉(zhuǎn)基因水稻的耐旱性,將2個(gè)轉(zhuǎn)基因株系(A202和A212)與野生型對照進(jìn)行同盆栽培,以便使培養(yǎng)條件盡量保持一致,種子發(fā)芽后正常盆栽培養(yǎng)5 d,停止?jié)菜?花盆土壤自然干燥,使水稻幼苗承受實(shí)際的干旱脅迫,經(jīng)不同天數(shù)的干旱脅迫后,待部分植株出現(xiàn)萎蔫并呈現(xiàn)葉片有50%干枯時(shí),恢復(fù)澆水并觀察水稻苗的生長狀況(圖8)。轉(zhuǎn)基因苗(右側(cè))在脅迫處理時(shí)和恢復(fù)澆水后都表現(xiàn)比野生型水稻苗(左側(cè))有更多的綠色部分,說明轉(zhuǎn)基因苗具有較強(qiáng)的耐旱性。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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