發(fā)布時(shí)間：2021-04-15 04:28

　　S-期激酶相關(guān)蛋白2A （S-phase kinase-associated protein 2A, SKP2A）是一個(gè)F-box蛋白,參與植物細(xì)胞分裂的調(diào)控,并能增加擬南芥（Arabidopsis thaliana）對(duì)滲透脅迫的抗性。為探究小麥（Triticum aestivum） SKP2A基因在響應(yīng)非生物逆境及病原菌侵染中的功能,本研究在克隆到小麥TaSKP2A基因的基礎(chǔ)上,對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,TaSKP2A編碼一條381個(gè)氨基酸組成的多肽,預(yù)測(cè)其等電點(diǎn)和分子量分別為6.83和40.87 kD;TaSKP2A為非分泌型蛋白質(zhì),定位于細(xì)胞核上,屬于富含亮氨酸重復(fù)（leucine-rich repeat, LRR）型F-box蛋白。qRT-PCR結(jié)果顯示,TaSKP2A在雌蕊和旗葉中的表達(dá)量較高,在幼莖和雄蕊中較低;經(jīng)水楊酸（salicylic acid, SA）和NaCl處理后TaSKP2A分別在24和48 h出現(xiàn)上調(diào)表達(dá);在H₂O₂脅迫下,TaSKP2A基因整體呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá);在葉銹菌（Puccinia triticina... 

【文章來(lái)源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,28(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【部分圖文】：

小麥Ta SKP2A序列特征分析

為了解TaSKP2A基因響應(yīng)激素及生物/非生物逆境的表達(dá)情況，分別對(duì)小麥進(jìn)行鹽、干旱、H2O2、SA、MeJA、ABA和葉銹菌侵染等處理。結(jié)果表明，在不同處理下TaSKP2A基因的表達(dá)模式不同(圖3)。NaCl處理后，TaSKP2A基因僅在48 h時(shí)出現(xiàn)明顯地上調(diào)表達(dá)，為0 h的2.4倍(P<0.05)，其他時(shí)間的表達(dá)與0 h樣品差異均不明顯；在H2O2脅迫下，TaSKP2A基因整體呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，至48 h，表達(dá)量?jī)H為對(duì)照的1/4；在PEG6000模擬的干旱脅迫條件下，TaSKP2A基因表達(dá)量變化不大(圖3A)。

根據(jù)文庫(kù)篩選獲得的靶蛋白編碼基因序列結(jié)合NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，獲得小麥及其近緣種屬中基因全長(zhǎng)序列，以此為模板，設(shè)計(jì)合成引物，以Tc Lr15接種葉銹菌株05-19-43(2)的cDNA為模板，獲得基因完整ORF區(qū)。將完整讀碼框序列構(gòu)建AD-prey載體，與BD-TaSKP2A共轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109。在含有X-α-Gal的四缺固體培養(yǎng)基上進(jìn)行回復(fù)驗(yàn)證。如圖5所示，發(fā)現(xiàn)TaCHI和TaSKP1與TaSKP2A的組合在含有X-α-Gal的培養(yǎng)基上均能正常生長(zhǎng)，且菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，表明存在相互作用。圖4 TaSKP2A篩選酵母cDNA文庫(kù)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]谷子F-box家族基因的鑒定、分類及干旱響應(yīng)[J]. 霍冬英,鄭煒君,李盼松,徐兆師,周永斌,陳明,馬有志,閔東紅,張小紅.  作物學(xué)報(bào). 2014(09)
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本文編號(hào)：3138668