我國是玉米種植大國,玉米質(zhì)量問題至關(guān)重要,為保證其質(zhì)量,除了良好的品種之外,品種的真實性、純度等問題也是不可忽略的。近年來,隨著分子標記的廣泛應用,玉米的真實性和純度鑒定變得更為簡單和準確。本研究以玉米全基因組重測序數(shù)據(jù)開發(fā)出的新的核基因組SSR標記以及葉綠體的InDel標記為基礎(chǔ),利用新的SSR標記建立多重PCR和電泳體系、構(gòu)建DNA指紋數(shù)據(jù)庫,便于高通量玉米的真實性和純度鑒定,采用葉綠體InDel標記對玉米核基因組上無法鑒定的信息,比如玉米正反交的快速鑒定進行進一步補充。第一部分:Perfect SSR多重PCR體系建立及數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建。本研究以玉米的重測序數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)開發(fā)并設(shè)計了一批SSR標記,根據(jù)染色體位置、擴增片段大下、熒光顏色等信息從111對新的SSR引物中挑選出適合組成多重PCR的40對新SSR引物。通過熒光定量PCR和瓊脂糖凝膠電泳確定了多重PCR的最適DNA濃度及最適擴增條件,以24個代表性玉米品種為研究材料,其中包括目前推廣面積較廣的4套三聯(lián)體材料和12個玉米骨干自交系,對40對新引物進行篩選和優(yōu)化并從中最終挑選出32對引物,組建了4組8重PCR擴增,2組16重電泳,以... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖124個DNA（200ng/μL）瓊脂糖凝膠電泳圖

圖 2 不同 DNA 濃度對引物的影響Figure 2 Impact of different DNA concentration on primer(ng/μL)

圖 3 不同 DNA 濃度下達到平臺期的所需循環(huán)數(shù)及擴增產(chǎn)物量Figure 3 Cycles and amplification product amount of different DNA concentration以上四個濃度的基礎(chǔ)上又進行了 DNA 濃度為 5 ng/μL 的擴增效果對比，并對 DNA 濃度進行了統(tǒng)計分析，比較它們和擴增達到平臺期的所需循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物趨勢和關(guān)系（圖 3）�？梢钥闯鲭S著 DNA 濃度的不斷增加，所需循環(huán)數(shù)逐漸降A(chǔ) 濃度在 12.5 ng/μL 時，擴增產(chǎn)物量達到頂峰，高于或者是低于此值擴增產(chǎn)物所降低，因此后續(xù)的試驗樣品濃度均采用 12.5 ng/μL。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2985690