大豆是喜磷作物,缺磷是限制大豆產(chǎn)量的主要因素之一。雖然磷素在土壤中大量存在,但土壤中可供作物吸收的磷素卻十分有限,施用磷肥雖然可以緩解土壤缺磷,但磷礦緊缺,而且大量施肥對(duì)環(huán)境造成污染。因此為了明確磷高效基因型品種對(duì)磷的吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)途徑,提高大豆對(duì)土壤中磷的利用效率進(jìn)行下述試驗(yàn)。試驗(yàn)采用磷高效大豆品種和磷低效大豆品種分別在常磷(P=0.5mmol/L)和低磷(P=0.005mmol/L)條件下進(jìn)行處理,結(jié)果表明:兩類型大豆品種在根系形態(tài)、磷含量和游離氨基酸含量上差異顯著。低磷處理下,磷高效大豆品種的總根長(zhǎng)更長(zhǎng),根尖數(shù)更多,磷低效大豆品種的游離氨基酸含量增加,并且兩類型大豆品種根系的磷含量均下降。對(duì)低磷脅迫處理后的兩類型大豆品種的根系進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)分析,共得到9669個(gè)差異表達(dá)基因,從中發(fā)現(xiàn)236個(gè)基因參與低磷響應(yīng),其中10個(gè)基因是與低磷脅迫相關(guān)的基因。這其中進(jìn)一步研究了PHF1基因。PHF1是磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因,GmPHF1(登錄號(hào):Glyma.20G190300)的CDs為1185bp,編碼394個(gè)氨基酸。對(duì)其在各組織的表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn),GmPHF1基因主要在大豆根系及葉片中表達(dá)。對(duì)其進(jìn)行克隆,構(gòu)建了植物過(guò)表達(dá)載體pCAMBIA3300N-GmPHF1和pCNG-GmPHF1-GFP。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明,GmPHF1基因定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。初步得到過(guò)表達(dá)GmPHF1基因的擬南芥T2代轉(zhuǎn)基因植株。
【學(xué)位單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S565.1
【部分圖文】：

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 技術(shù)，目前最活躍最普遍的是 RNA-Seq 技因表達(dá)水平分析和差異表達(dá)分析、新基因的能注釋都有所體現(xiàn)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和應(yīng)用是活中起到愈發(fā)重要的作用（王楚彪，2018）。0，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的基本流程如圖 1，它能對(duì)基基因組的 DNA 隨機(jī)打斷成<700bp 的小片段A 片段進(jìn)行單末端或雙末端測(cè)序，無(wú)需克隆，其具有數(shù)據(jù)量大，覆蓋范圍廣，準(zhǔn)確率高所有生物等特點(diǎn)。

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 cDNA 文庫(kù)創(chuàng)建以及 Ilhimina（HiSeqTM2000）測(cè)序工作交由北完成。信息學(xué)分析流程數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾得到 Clean Data，與指定的參考基因組進(jìn)行序列比ta，進(jìn)行插入片段長(zhǎng)度檢驗(yàn)、隨機(jī)性檢驗(yàn)等文庫(kù)質(zhì)量評(píng)估；進(jìn)行可變和基因結(jié)構(gòu)優(yōu)化等結(jié)構(gòu)水平分析；根據(jù)基因在不同樣品或不同樣異表達(dá)分析、差異表達(dá)基因功能注釋和功能富集等表達(dá)水平分析流程見(jiàn)圖 2.

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果與分析根系形態(tài)及磷素含量對(duì)低磷脅迫的響應(yīng)形態(tài)的差異同磷濃度處理 7 天和 14 天后，磷高效大豆和磷低效大豆品種的根系形態(tài)示。處理 7 天后，磷高效大豆品種的根系比磷低效品種的根系更龐大， 14 天后，磷高效大豆品種的根系比磷低效品種的二級(jí)側(cè)根更多。
【相似文獻(xiàn)】

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1 單玉姿;大豆低磷脅迫差異表達(dá)基因挖掘及GmPHF1基因的克隆與轉(zhuǎn)化[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2843764