隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的迅猛發(fā)展,轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性受到了廣泛關(guān)注。轉(zhuǎn)基因檢測用有證標準物質(zhì)在確保轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品定性、定量檢測結(jié)果的可比性和可追溯性方面發(fā)揮著重要作用。但轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)標準物質(zhì)的開發(fā)相對緩慢,其中一個難點是制備高純度的轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)候選物。蘇云金芽胞桿菌Bacillus thuringiensis cry1Ah1基因因其對亞洲玉米螟等鱗翅目害蟲有很好的殺蟲活性,已用于轉(zhuǎn)基因抗蟲作物的研制,并獲得具有較好抗蟲性狀的轉(zhuǎn)基因株系。為了研發(fā)Cry1Ah蛋白有證標準物質(zhì),亟需建立其制備及純化體系。文中優(yōu)化了利用Bt表達系統(tǒng)制備Cry1Ah蛋白的體系,利用離子交換色譜法和排阻色譜法逐級純化的方法,獲得了高純度的Cry1Ah蛋白(排阻色譜純度:99.6%)。生物活性測定結(jié)果表明,純化的Cry1Ah蛋白與原毒素對小菜蛾P(guān)lutellaxylostella的殺蟲活性沒有顯著差異。最后使用Edman降解法和質(zhì)譜法確定了Cry1Ah蛋白活化后的氨基酸序列。綜上所述,獲得的Cry1Ah純蛋白可用于蛋白質(zhì)標準物質(zhì)的研制。

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【文章目錄】：
1 Materials and methods
    1.1 Materials
    1.2 Protein extraction and activation
    1.3 Protein purification
    1.4 Purity identification
    1.5 Amino acid sequence determination
    1.6 Insect bioassay
2 Results and discussion
    2.1 Protein extraction and activation
    2.2 Protein purification and purity identification
    2.3 Amino acid sequence determination
    2.4 Insect bioassay
3 Conclusion



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