粉紅螺旋聚孢霉67-1產(chǎn)厚垣孢子相關(guān)基因的篩選與功能研究
發(fā)布時(shí)間：2021-10-13 02:43
粉紅螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea）是一類重要的生防真菌,可以防治灰霉菌、核盤(pán)菌、立枯絲核菌等多種植物真菌病害,具有很強(qiáng)的生防潛力。目前真菌制劑多為分生孢子制劑,穩(wěn)定性較差,貨架期短。厚垣孢子是真菌在特定條件下產(chǎn)生的一種抗逆結(jié)構(gòu),對(duì)真菌生防制劑的研發(fā)具有重要意義,但迄今關(guān)于生防真菌厚垣孢子形成相關(guān)基因的研究極少。為篩選粉紅螺旋聚孢霉產(chǎn)厚垣孢子相關(guān)基因,本研究以實(shí)驗(yàn)室前期分離的粉紅螺旋聚孢霉高效菌株67-1為材料,通過(guò)高通量測(cè)序獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)厚垣孢子轉(zhuǎn)錄組,篩選出不同產(chǎn)孢條件下穩(wěn)定表達(dá)的適宜內(nèi)參基因,并通過(guò)基因敲除,證明己糖激酶基因、聚酮化合物羥化酶基因和醛脫氫酶基因在粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株厚垣孢子形成過(guò)程中的作用,為揭示厚垣孢子形成機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。為獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)厚垣孢子相關(guān)基因,本實(shí)驗(yàn)以粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株為材料,分別在36 h和72 h取樣,通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)孢差異表達(dá)基因。轉(zhuǎn)錄組分析獲得549,661,174 clean reads。36 h時(shí)有67個(gè)基因上調(diào)表達(dá),...
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)嶒?yàn)步驟Fig.2.1Stepsoftranscriptomesequenceanalysis
農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 產(chǎn)厚垣孢子轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 分生孢子和厚垣孢子顯微觀察以實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)的產(chǎn)孢培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，通過(guò)調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)條件及 pH 和溫度，對(duì)產(chǎn)厚垣孢養(yǎng)基進(jìn)一步優(yōu)化，獲得粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株產(chǎn)厚垣孢子適宜培養(yǎng)基。用顯微鏡（Olympus61, Tokyo, Japan）觀察分生孢子和厚垣孢子。在厚垣孢子培養(yǎng)過(guò)程中，分生孢子被抑制，分生培養(yǎng)過(guò)程中未觀察到厚垣孢子。可以看到厚垣孢子來(lái)自菌絲的頂端或者中部，在培養(yǎng)后期大菌絲都能轉(zhuǎn)化成厚垣孢子，和分生孢子相比，厚垣孢子較大、細(xì)胞壁較厚（圖 2.2）。
圖 2.3 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個(gè)樣品提取 RNA 電泳驗(yàn)證對(duì)照（產(chǎn)分生孢子過(guò)程）36 h 三個(gè)重復(fù)，4-6 表示對(duì)照 72 h 三個(gè)重復(fù)，7-9 表示處理（產(chǎn)厚垣孢子過(guò)個(gè)重復(fù)，10-12 表示處理 72 h 三個(gè)重復(fù)Fig. 2.3 Electrophoresis verification of 12 RNA samples extracted from C. rosea 67-1 strain three repeats of the control ( process produce conidiospores) at 36 h, 4-6 show three repeats of the control ahow three repeats of the treatment (process produce chlamydospores) at 36 h, 10-12 show three repeats ot at 72 h表 2.2 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個(gè)樣品 RNA 提取質(zhì)量Table 2.2 Quality of 12 RNA extracted from C.rosea 67-1 strainConcentration(ng/ l)Amount( g)OD260/280OD260/230RIN 28S/18S-1 225 15.75 2.15 2.21 8.4 1.6-2 229 16.03 2.16 2.26 9.3 1.7-3 158 18.96 2.13 2.11 9.0 1.6-1 178 24.92 2.13 2.23 9.8 1.7-2 194 13.58 2.17 2.24 9.3 1.8
本文編號(hào)：3433802
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
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【部分圖文】：
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)嶒?yàn)步驟Fig.2.1Stepsoftranscriptomesequenceanalysis
農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 產(chǎn)厚垣孢子轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 分生孢子和厚垣孢子顯微觀察以實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)的產(chǎn)孢培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，通過(guò)調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)條件及 pH 和溫度，對(duì)產(chǎn)厚垣孢養(yǎng)基進(jìn)一步優(yōu)化，獲得粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株產(chǎn)厚垣孢子適宜培養(yǎng)基。用顯微鏡（Olympus61, Tokyo, Japan）觀察分生孢子和厚垣孢子。在厚垣孢子培養(yǎng)過(guò)程中，分生孢子被抑制，分生培養(yǎng)過(guò)程中未觀察到厚垣孢子。可以看到厚垣孢子來(lái)自菌絲的頂端或者中部，在培養(yǎng)后期大菌絲都能轉(zhuǎn)化成厚垣孢子，和分生孢子相比，厚垣孢子較大、細(xì)胞壁較厚（圖 2.2）。
圖 2.3 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個(gè)樣品提取 RNA 電泳驗(yàn)證對(duì)照（產(chǎn)分生孢子過(guò)程）36 h 三個(gè)重復(fù)，4-6 表示對(duì)照 72 h 三個(gè)重復(fù)，7-9 表示處理（產(chǎn)厚垣孢子過(guò)個(gè)重復(fù)，10-12 表示處理 72 h 三個(gè)重復(fù)Fig. 2.3 Electrophoresis verification of 12 RNA samples extracted from C. rosea 67-1 strain three repeats of the control ( process produce conidiospores) at 36 h, 4-6 show three repeats of the control ahow three repeats of the treatment (process produce chlamydospores) at 36 h, 10-12 show three repeats ot at 72 h表 2.2 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個(gè)樣品 RNA 提取質(zhì)量Table 2.2 Quality of 12 RNA extracted from C.rosea 67-1 strainConcentration(ng/ l)Amount( g)OD260/280OD260/230RIN 28S/18S-1 225 15.75 2.15 2.21 8.4 1.6-2 229 16.03 2.16 2.26 9.3 1.7-3 158 18.96 2.13 2.11 9.0 1.6-1 178 24.92 2.13 2.23 9.8 1.7-2 194 13.58 2.17 2.24 9.3 1.8
本文編號(hào)：3433802
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