蘋果輪紋病是蘋果生產(chǎn)中最重要的病害之一,可危害蘋果的枝干和果實,給蘋果產(chǎn)業(yè)造成巨大損失,據(jù)統(tǒng)計,中國蘋果產(chǎn)區(qū)每年因蘋果輪紋病造成的損失高達50億元。WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物的各種生理過程,其中一個主要功能與植物的抗病有關(guān),在植物的抗病反應(yīng)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用。而到目前為止,雖然WRKY轉(zhuǎn)錄因子在擬南芥、煙草等模式植物中已有較深入研究,但對于調(diào)控蘋果對輪紋病抗性的蘋果基因組WRKY轉(zhuǎn)錄因子的篩選與鑒定,國內(nèi)外仍研究報道較少,因此,本研究以轉(zhuǎn)基因蘋果愈傷組織和擬南芥為材料,并利用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、接菌等技術(shù),鑒定MdWRKY40基因的生物學(xué)功能,來闡明MdWRKY40基因在蘋果抵御輪紋病菌侵染過程中的作用,為進一步揭示蘋果的抗病機制以及培育抗病新品種提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.以‘紅富士’蘋果果實為試材,克隆得到MdWRKY40基因的全長CDS序列,系統(tǒng)進化樹分析表明,蘋果MdWRKY40與白梨PbWRKY40序列相似性最高,親緣關(guān)系最近,蛋白序列比對分析發(fā)現(xiàn),MdWRKY40蛋白與擬南芥AtWRKY4、AtWRKY40蛋白都包含5個β折疊,都含有一個C₂H

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MdWRKY40表達載體構(gòu)建（A）MdWRKY40編碼區(qū)全長的PCR擴增；（B）pCB302-35S-MdWRKY40-2HA表達載體酶切驗證

圖 7 愈傷組織（A）輪紋病菌侵染蘋果愈傷組織表型；（Fig. 7 Callus Inocula(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothiB. d3.6.3 超表達 MdWRKY40 對接菌后蘋果愈傷病程相關(guān)蛋白 PRs 是植物先天免疫系統(tǒng)面發(fā)揮重要作用，其中 PR1、PR2 和 PR5 主參與 JA 抗病信號通路。為了進一步研究 M用，通過 qRT-PCR 方法檢測接種蘋果輪紋病‘王林’愈傷組織中病程相關(guān)蛋白基因的表相關(guān)蛋白基因 MdPR2、MdPR5、MdPR8 的8）。圖 7 的結(jié)果顯示，接種蘋果輪紋病菌

Fig. 10 Gene silencing callu(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothidedothidea; (C) MdPR2 gene expression induced by B. dothidsamples 0-0.5 cm, 0.5-1 cm, and 1-1.5 cm from lesions,thdothidea; (E) MdPR5 gene expression induced by B. dot3.8 異源表達 MdWRKY40 對擬南芥輪3.8.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定將構(gòu)建的 MdWRKY40 過表達載體轉(zhuǎn)化利用 35S 啟動子引物和下游克隆引物進行然后利用半定量和定量 PCR 進一步驗證陽基因在轉(zhuǎn)基因株系 7#、12#中的表達量顯著果顯示，與野生型擬南芥相比，轉(zhuǎn)基因擬南585 倍和 545 倍，與半定量結(jié)果一致，證明達（圖 11C）。A7#12#ColCK 質(zhì)粒/plasmi1500 bp

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2978208