蜂蜜作為天然的甜味食品,素有“天然抗生素”的美譽,然而近年來南方地區(qū)頻發(fā)的蜂蜜中毒事件,引起了廣大消費者的恐慌,成為食品安全問題中亟待解決的突出問題。黃杜鵑和曼陀羅等有毒蜜源植物在我國分布廣泛,在大宗蜜源植物流蜜匱乏時,蜜蜂易于采集其花蜜,并將有害物質(zhì)轉(zhuǎn)移并富集到蜂蜜中,形成有毒蜂蜜。木藜蘆烷類毒素和托品烷類生物堿分別作為杜鵑和曼陀羅中主要毒性成分,誤食微量便可導致人的中毒反應,嚴重者甚至導致死亡。鑒于此,本研究基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜開發(fā)了蜂蜜中的木藜蘆烷類毒素及托品烷類生物堿的準確定量分析方法并進行系統(tǒng)的方法學驗證。旨在及時有效的規(guī)避有毒蜂蜜誤食的風險,保護消費者的安全,為蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全及風險評估等提供技術支持。本研究主要分為兩個部分,第一部分建立了蜂蜜中4種木藜蘆烷類毒素(鬧羊花毒素II、鬧羊花毒素III、木藜蘆毒素I和木藜蘆毒素III)的UHPLC-MS/MS檢測方法,采用甲醇/水(20:80,v/v,含0.1%乙酸)作為提取液,0.1%乙酸-水和0.1%乙酸-甲醇作為流動相進行梯度洗脫。該方法的檢測限為2.0μg/kg~5.0μg/kg,定量限為5.0μg/kg~10.0μg/kg。在5.0~50.0μg/kg添加濃度范圍內(nèi),4種木藜蘆烷類毒素的平均回收率為77.94%~109.21%,日內(nèi)變異系數(shù)為4.06%~9.82%,日間變異系數(shù)為4.94%~13.11%,并采用開發(fā)的方法對我國各地17種蜂蜜品種進行木藜蘆烷類毒素檢測分析,結果表明我國部分蜂蜜中存在木藜蘆烷類毒素污染的風險,其污染的蜜種主要集中在杜鵑蜂蜜、雜花蜂蜜以及部分野生蜂蜜中。然而,我國大宗商品蜜中未檢出該類污染物,較為安全。第二部分,本研究首先采用UHPLC-Q Exactive Plus高分辨質(zhì)譜技術對曼陀羅花蜜中的托品烷類生物堿進行識別與鑒定,共得到4種托品烷類生物堿,即茛菪堿、東茛菪堿、山茛菪堿、去甲基山茛菪堿。為明確曼陀羅花蜜中的托品烷類生物堿是否通過蜜蜂的采集行為轉(zhuǎn)移至蜂蜜中形成有毒蜂蜜,本研究采用液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜對蜂蜜中的托品烷類生物堿進行檢測分析,結果表明疑似陽性蜂蜜樣本中存在與曼陀羅花蜜中一致的4種托品烷類生物堿,其中東茛菪堿約占85.0%以上。為了探究我國蜂蜜中托品烷類生物堿污染的含量,本試驗開發(fā)了蜂蜜中4種托品烷類生物堿的UHPLC-MS/MS定量檢測方法。采用0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈作為流動相,甲醇/水(20:80,v/v)作為提取液,得到該方法的檢測限為0.05μg/kg,定量限為0.1μg/kg。在0.1~0.5μg/kg添加濃度范圍內(nèi),平均回收率為74.93%~103.42%,日內(nèi)變異系數(shù)為2.63%~10.81%,日間變異系數(shù)為3.78%~14.13%。
【學位單位】：煙臺大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S896.1;O657.63
【部分圖文】：

煙臺大學碩士學位論文本試驗實際樣品的檢測中，待測的 17 種蜂蜜中共有 7 種蜂蜜存在不同程度的木藜蘆烷類毒素污染，即杜鵑蜂蜜，野生蜂蜜、雜花蜜、雪脂蓮蜜、柑橘蜜、石榴蜜和油菜蜜，其中杜鵑蜂蜜中木藜蘆烷類毒素含量最高，鬧羊花毒素 II 達 661.5 μg/kg，鬧羊花毒素達 III 885.3 μg/kg，木藜蘆毒素 I 達 548.6 μg/kg，木藜蘆毒素 III 達 796.4μg/kg。另外，受檢的大宗商品蜜如荊條蜜、椴樹蜜、洋槐蜜、枸杞蜜和棗花蜜中均未檢出該類毒素，尚未發(fā)現(xiàn)木藜蘆毒素威脅，較為安全，如圖 2-2 所示。

煙臺大學碩士學位論文2.3.3 樣品前處理的優(yōu)化蜂蜜基質(zhì)較為黏稠，含糖量較高，當有機溶劑比例較高時則不易完全溶解，因此最終采用 20%的有機溶劑進行提取。文獻報道，酸化的有機溶劑有利于木藜蘆烷類毒素的提取，因此本文對甲醇/水（20:80，v/v）、乙腈/水（20:80，v/v）、乙酸乙酯/水(20:80，v/v)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%甲酸)等 5 種提取劑進行了測試，回收率如圖 2-5 所示。甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作為提取劑時，目標化合物表現(xiàn)出良好的回收率，目標物的平均回收率范圍為80.1~102.5，而乙酸乙酯的共萃取物較多，具有較強的基質(zhì)效應，回收率也相對較低。因此最終選擇甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作為提取溶液。由于低溫可以有效的促進糖和其他雜質(zhì)的沉淀，因此提取結束后采用低溫高速離心進行凈化，降低基質(zhì)效應，進而提高靈敏度。

40圖 3-3 4 種托品烷類生物堿二級碎片離子質(zhì)譜圖Fig.3-3 Fragment ion mass spectrum of 4 tropane alkaloids.

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1 汪禮權,秦國偉;杜鵑花科木藜蘆烷類毒素的化學與生物活性研究進展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);1997年04期

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1 張靜;蜂蜜中木藜蘆烷類毒素及托品烷類生物堿液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法的研究[D];煙臺大學;2019年

本文編號：2829327