辣椒是我國重要的蔬菜作物,炭疽病是辣椒的主要病害之一,對辣椒影響嚴(yán)重。本試驗鑒定了甘肅省天水辣椒炭疽病菌,測定了其侵染辣椒的基因差異表達,篩選了化學(xué)藥劑及拮抗內(nèi)生細(xì)菌,并對拮抗內(nèi)生細(xì)菌進行了鑒定,取得以下結(jié)論:1、辣椒炭疽病病原鑒定及其生物學(xué)特性測定甘肅省天水辣椒炭疽病菌菌落圓形,絨毛狀,初生菌絲奶白色,后菌落中央變?yōu)榛揖G色,分生孢子為橢圓形或圓柱狀,單孢,無色,內(nèi)含油滴,頂端稍尖,孢子大小為11.24~25.94μm×4.27~8.85μm,菌絲呈二叉狀銳角分支,有隔,分生孢子梗圓柱狀,無色,頂端產(chǎn)生孢子,分生孢子盤呈簇狀,透明,大小為11.28μm×13.10μm,結(jié)合CHSI、ACT、ITS、TUB2和GAPDH基因序列分析將其鑒定為好維爾炭疽菌(Colletotrichum scovillei)。25℃適宜該菌菌絲生長,35℃適宜產(chǎn)孢和孢子萌發(fā);pH為6時最適宜菌絲生長和孢子萌發(fā),pH為8時最適產(chǎn)孢;全黑暗有利于菌絲生長;最利于菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)的碳源分別為甘露醇、果糖和鼠李糖;最適氮源是蛋白胨。2、辣椒炭疽菌室內(nèi)高效藥劑的篩選苯醚甲環(huán)唑?qū)镁S爾炭疽菌菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制效果最好,EC_(50)值分別為0.0254μg/mL和0.0216μg/mL;復(fù)配劑苯醚甲環(huán)唑·氟硅唑?qū)镁S爾炭疽菌菌絲生長的抑制活性最高,EC_(50)為0.1882μg/mL,而苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯復(fù)配對孢子萌發(fā)抑制活性最高,EC_(50)為0.0541μg/m L。3、內(nèi)生拮抗細(xì)菌的分離、篩選及鑒定采用稀釋分離法從辣椒葉片中分離到58株內(nèi)生細(xì)菌,25株對好維爾炭疽菌的抑制率大于60%,其中L1-7和L3-5的抑菌率分別達79.72%和80.00%,均具有固氮和產(chǎn)IAA能力,且具有較高的耐鹽性;通過培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征,結(jié)合16S rDNA和gyrB基因序列分析,將其分別鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)和貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)。4、炭疽菌誘導(dǎo)下的辣椒基因表達譜分析通過高通量測序共獲得reads 49418873個,其中Clean reads 48719455,GC含量為43.44%,差異表達基因33070個,上調(diào)表達13304個,下調(diào)表達19766個;接菌0 h與其他時間點比對5組產(chǎn)生差異表達基因分別為7269、6274、6843、6871和5795個,其中上調(diào)表達分別為2879、2484、2918、2825和2198個。對差異基因的顯著性富集GO功能分析表明,分別富集到生物過程、分子功能和細(xì)胞組成的GO條目數(shù)為441、192和166,主要富集terms為葡聚糖代謝過程、細(xì)胞多糖代謝過程、類異戊二烯生物合成過程、單一生物生物合成過程、色素結(jié)合和氧化還原酶活性,作為供體作用于鐵-硫蛋白、催化活性、囊體腔、葉綠體包膜和細(xì)胞溶質(zhì)小核糖體亞基等途徑。差異表達基因顯著性富集于23個Pathway通路,主要有核糖體、苯丙烷類生物合成、氨基糖和核苷酸糖代謝、淀粉和蔗糖代謝、谷胱甘肽代謝及糖酵解/糖異生途徑等;共獲得83個共表達基因,6個基因同時參與2個以上通路,其中2個上調(diào)表達;植物與病原互作通路中篩選出43個共表達基因,其中20個基因上調(diào)表達。該結(jié)果初步揭示了辣椒與好維爾炭疽菌互作在轉(zhuǎn)錄水平上的差異表達情況,為進一步挖掘辣椒對好維爾炭疽菌的抗病基因及探究抗病機理提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.418.11
【部分圖文】：

編號為 LC8。在 25℃恒溫培養(yǎng) 9 天的 LC8 分餅接種于蛋白胨液體培養(yǎng)基，恒溫?fù)u床培養(yǎng) 6 h用噴霧接病法接種于致傷新鮮無病的辣椒葉片典型癥狀，對照無典型癥狀產(chǎn)生，確定 LC8 為圖 2-1 辣椒炭疽病田間癥狀Figure 2-1 Symptoms in the fieldsC

辣椒炭疽病發(fā)病初期，果實上形成水漬狀斑點，隨著時間推移，果實形成邊緣深褐色中間灰色的凹陷斑，且在病斑上形成黑色小點，濕度高時會有澄色粘液流出；在葉片上隨著侵染時間變長病斑擴展為中間白色、周圍褐色的圓形或近圓形病斑，干燥時病部皺縮變薄，易破裂，后期在病斑上可形成黑色小點。2.2 病原菌分離和致病性測定植物組織分離法分離得到 1 個分離物，編號為 LC8。在 25℃恒溫培養(yǎng) 9 天的 LC8 分離物平板中央用 5 mm 打孔器切取 10 塊菌餅接種于蛋白胨液體培養(yǎng)基，恒溫?fù)u床培養(yǎng) 6 h（25℃，180 rpm·min-1）后的孢子懸浮液采用噴霧接病法接種于致傷新鮮無病的辣椒葉片和果實上，17 d 后在接種葉片和果實上形成典型癥狀，對照無典型癥狀產(chǎn)生，確定 LC8 為辣椒炭疽病的病原菌（圖 2-2）。圖 2-1 辣椒炭疽病田間癥狀Figure 2-1 Symptoms in the fieldsA B C

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019 屆碩士學(xué)位論文圓形或圓柱狀，單孢，無色，內(nèi)含油滴，頂端稍尖，孢子大小為 11.24～25.94 μm×4.27～8.85 μm，平均 14.30 μm×5.66 μm；菌絲呈二叉狀銳角分支，有隔，分生孢子梗圓柱狀，無色，頂端產(chǎn)生孢子；分生孢子盤呈簇狀，透明，大小為 11.28 μm×13.10 μm。（圖 2-3）。A B C D

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本文編號：2809978