【摘要】：麝鼠(Ondatra zibethicus Linnaeus)又稱為青根貂,是田鼠亞科麝鼠屬中唯一物種。雄性麝鼠有一對泌香腺,繁殖時可分泌具有明顯芳香氣味的乳白色麝鼠香。麝鼠香的主要藥用成分為麝香酮,與天然麝香相近,所以具有成為天然麝香替代品的巨大潛力。麝鼠相較于其它鼠類,前列腺組織非常發(fā)達。研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射麝鼠香可使小鼠的前列腺組織增大,所以麝鼠香除了具有外激素的作用還可能具有調(diào)節(jié)麝鼠自身發(fā)育的作用。本研究中通過RNA-seq測序技術,對麝鼠泌香期和非泌香期的前列腺組織進行了轉錄組測序,并通過生物信息學從整體水平上對麝鼠前列腺的發(fā)育進行了研究。同時,本研究中建立了麝鼠前列腺成纖維樣細胞的原代培養(yǎng)方法,構建了麝鼠前列腺成纖維樣細胞的細胞模型,證明了該細胞體外培養(yǎng)的可行性。結合RNA-seq測序結果和原代培養(yǎng)的細胞模型,對原代細胞進行了麝鼠香干預試驗,將傳代至第3代的原代培養(yǎng)麝鼠前列腺成纖維樣細胞分為2組,10μg/ml麝鼠香組記為A1組,0.1%DMSO對照組記為B1組。實驗結果顯示,A1組的Bcl-2轉錄水平高于B1組約4倍,Bax基因轉錄水平較B1組低。麝鼠香可以提高細胞Bcl2基因的轉錄水平,降低Bax基因的轉錄水平,提高Bcl2/Bax的比值,起到抗細胞凋亡的作用。為初步研究麝鼠香調(diào)節(jié)Bc12/Bax比值的作用機制,本實驗使用HEK293T細胞,并利用麝鼠香的主要成分麝香酮進行干預,將復蘇后傳代至第3代的HEK293T細胞分為5組,3μg/ml麝香酮組記為A2組,5μg/ml麝香酮組記為B2組,7μg/ml麝香酮組記為C2組,9μg/ml麝香酮組記為D2組,0.1%DMSO對照組記為E2組。每組設置3個生物學重復。相較于E2組,A2、B2、C2和D2組NF-κB基因的轉錄水平分別為E2組的1.39倍、1.53倍、1.72倍和1.78倍;PI3K基因的轉錄水平分別為E2組的1.41倍、1.58倍、1.71倍和1.79倍;ERK基因的轉錄水平分別為E2組的1.27倍、1.39倍、1.53倍和1.77倍;MEK基因的轉錄水平分別為E2組的1.2倍、1.29倍、1.32倍和1.38倍;p53基因的轉錄水平分別為E2組的1.08倍、1.11倍、0.99倍和1.1倍。結果發(fā)現(xiàn):麝香酮會提升NF-κB、PI3K、MEK和ERK基因的轉錄水平,且具有明顯的量效關系。對于p53基因的影響并無明顯規(guī)律。因此推測,麝香酮調(diào)節(jié)細胞Bcl-2、Bax基因轉錄水平比值的改變可能是通過調(diào)節(jié)上述信號通路來完成的。通過RNA-seq測序部分和藥物干預細胞的實驗結果進行推測,麝鼠香對于麝鼠本身不只可以起到外激素的作用,還可以調(diào)節(jié)自身的生長發(fā)育情況,如可以促進麝鼠前列腺的發(fā)育。麝鼠香中的麝香酮等親脂性氣味分子隨血液循環(huán)到達前列腺組織,c75134_g2轉錄本所編碼的蛋白在這一過程中起到親脂性氣味分子載體的作用,并幫助其與受體結合,通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族基因的轉錄水平,起到抗細胞凋亡的作用,調(diào)節(jié)前列腺組織的發(fā)育過程。
【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S865.27
【圖文】：

逡逑現(xiàn)泌香期時麝鼠前列腺組織中信號轉導機制條目出現(xiàn)顯著富集，見圖３－２。對基因做逡逑ＫＯ注釋后，可根據(jù)它們參與的ＫＥＧＧ代謝通路進行分類，結果見圖３－３。逡逑Ｇｅｎｅ邋ＦｕｎｃＵｃｍ邐（ＧＯ｝逡逑Ｂｋ＾ａｇｉｃａ＇－邐Ｃ？？ｕ�。幔诲澹茫铮椋蓿椋穑簦澹颍暹姡停悖樱澹悖椋椋簦澹驽澹疲幔睿悖樱希铄义蠄D３－１基因功能分類（ＧＯ）逡逑Ｆｉｇ邋３－１邋Ｇｅｎｅ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋（ＧＯ）逡逑Ｋ0Ｇ邋ＦｉＨＫＳｔｏｎ邋ＣＳａｓｓｉｆｓｃｓｔｉｏｎ逡逑｜邋Ｋ0Ｑ邋５ｆｅａｃ／ｓ？？？逡逑}牐澹掊澹蓿蓿椋粒螅螅螅椋椋螅幔觶浚幔悖蓿幔悖媯濉輳幔輳�？逦＾邋ＫＣｉＳ邋＊ｃ？ｉ！ｙ辶x希е�；Ａｔ}澹椋螅輳蓿錚海哄危睿蓿�？ａｉｉ洋ｔａ辶x希掊危浚荊櫻輳櫻ΓВ遙跡�？．ｃＫＷ}椋�？ｔ倽}潁媯簦常停櫻椋輳常�？＊}唬掊危爸鄭∧閭蓕0邐輯．

邐東北林業(yè)大學碩士學位論文邐逡逑現(xiàn)泌香期時麝鼠前列腺組織中信號轉導機制條目出現(xiàn)顯著富集，見圖３－２。對基因做逡逑ＫＯ注釋后，可根據(jù)它們參與的ＫＥＧＧ代謝通路進行分類，結果見圖３－３。逡逑Ｇｅｎｅ邋ＦｕｎｃＵｃｍ邐（ＧＯ｝逡逑Ｂｋ＾ａｇｉｃａ＇－邐Ｃ？？ｕ�。幔诲澹茫铮椋蓿椋穑簦澹颍暹姡停悖樱澹悖椋椋簦澹驽澹疲幔睿悖樱希铄义蠄D３－１基因功能分類（ＧＯ）逡逑Ｆｉｇ邋３－１邋Ｇｅｎｅ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋（ＧＯ）逡逑Ｋ0Ｇ邋ＦｉＨＫＳｔｏｎ邋ＣＳａｓｓｉｆｓｃｓｔｉｏｎ逡逑

圖３－５差異基因類聚圖邐圖３－６差異表達基因的火山圖逡逑Ｆｉｇ邋３－５邋Ｔｈｅ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ邋ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邐Ｆｉｇ邋３－６邋Ｖｏｌｃａｎｏ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ逡逑ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ邋ｍａｐ邐ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邋ｇｅｎｅｓ逡逑顯著差異表達基因的注釋逡逑用ＧＯｓｅｑ軟件對顯著差異表達基因做ＧＯ富集性分析，基于ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫進行逡逑異表達基因Ｐａｔｈｗａｙ顯著性富集分析，分析差異基因參與的生化代謝途徑和信號逡逑路。繪制顯著差異表達基因ＫＥＧＧ富集散點圖從整體水平上揭示泌香期和非泌逡逑達水平存在顯著差異的基因所參與的主要代謝途徑和信號轉導途徑。逡逑Ｕｎｉｇｅｎｅｓ進行ＧＯ富集性分析表明共有２０２８７條轉錄本得到了歸類注釋，對顯著逡逑－２４－逡逑

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 竭航;趙貴軍;封孝蘭;張承露;陳強;曾德軍;;麝鼠泌香機制研究進展[J];特產(chǎn)研究;2015年03期

2 劉小珍;鄭智國;凌志強;;腫瘤細胞原代培養(yǎng)與保存[J];中國腫瘤;2015年04期

3 靳輝;楊蓬勃;馮改豐;賈寧;楊維娜;王唯析;;胰蛋白酶消化強度優(yōu)化獲得高純度體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞[J];生理學報;2015年01期

4 白冰;吳新民;郭亞明;周文策;李汛;李興源;馬榮花;;分泌型卷曲相關蛋白5通過調(diào)控Wnt信號通路對代謝性疾病發(fā)病的影響[J];蘭州大學學報(醫(yī)學版);2015年01期

5 王榮春;孫建華;何述棟;馬鶯;;胰蛋白酶抑制劑的結構與功能研究進展[J];食品科學;2013年09期

6 饒冬梅;;NCBI數(shù)據(jù)庫及其資源的獲取[J];科技視界;2013年07期

7 王志強;梁銳;陳明清;鄧俊;李文亮;陳天星;文政琦;楊軍;;胰蛋白酶消化法和組織塊法原代培養(yǎng)人包皮成纖維細胞的比較[J];生命科學研究;2012年03期

8 王興春;楊致榮;王敏;李瑋;李生才;;高通量測序技術及其應用[J];中國生物工程雜志;2012年01期

9 梁燁;陳雙燕;劉公社;;新一代測序技術在植物轉錄組研究中的應用[J];遺傳;2011年12期

10 楊營;蔡永華;;促進麝香增產(chǎn)的新途徑研究[J];四川畜牧獸醫(yī);2011年09期

相關博士學位論文 前4條

1 林珊;基于PI3K/Akt信號轉導通路探討麝香通心滴丸抗心肌缺血的物質(zhì)基礎和作用機制[D];福建中醫(yī)藥大學;2017年

2 王歡;基于RNA-seq技術的乙肝相關肝硬化肝細胞轉錄組學研究[D];吉林大學;2017年

3 劉也行;NF-κB信號通路相關蛋白NleC和RIP1的結構與功能研究[D];清華大學;2015年

4 王冰;華北大黑鰓金龜嗅覺相關蛋白互作機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

相關碩士學位論文 前3條

1 趙雪飛;HPLC法應用于麝香鑒別的研究[D];東北林業(yè)大學;2017年

2 陸路;性類固醇激素對麝鼠泌香腺功能的調(diào)節(jié)作用[D];北京林業(yè)大學;2014年

3 呂波;基于數(shù)據(jù)庫的關于蛋白質(zhì)家族和折疊子的統(tǒng)計推斷[D];南京航空航天大學;2009年

本文編號：2757710