本文關(guān)鍵詞：鹽酸致小鼠急性肺損傷模型及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 建立一種操作簡(jiǎn)捷可靠、劑量精確的小鼠單側(cè)肺損傷模型的方法,本研究在總結(jié)既往氣管滴注方法的基礎(chǔ)上,對(duì)導(dǎo)管、滴注手法加以改進(jìn),引入指示劑和脂多糖,通過(guò)肉眼觀察大體肺臟解剖和病理組織學(xué)變化,驗(yàn)證建立及完善一種簡(jiǎn)捷可靠、劑量精確的小鼠單側(cè)肺導(dǎo)管滴注方法。方法 18只雄性健康C57BL/6J小鼠按照體重隨機(jī)分為3組:(1)正常對(duì)照組(normal saline,NS組)經(jīng)導(dǎo)管滴注無(wú)菌生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺;(2)伊文斯蘭組(Evans blue,EB組)同樣方法滴注0.05%伊文斯蘭-生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺;(3)脂多糖組(lipopolysaccharide,LPS組)則滴注脂多糖-生理鹽水(3.5mg/Kg體重)至小鼠左肺;各組小鼠麻醉固定后,頸前皮膚消毒行氣管切開(kāi),暴露約5 mm氣管,導(dǎo)管經(jīng)口咽部插入左肺主支氣管,滴注無(wú)菌生理鹽水/0.05%伊文斯蘭-生理鹽水/脂多糖-生理鹽水,隨后緩慢推注約30倍液體體積的空氣,將小鼠豎直放置5分鐘后,以仰臥位放置于小動(dòng)物加熱板。(1)密切觀察實(shí)施經(jīng)導(dǎo)管氣管滴注后小鼠的情緒、活動(dòng)、飲食水等狀態(tài)的變化;(2)滴注6h時(shí),在小鼠清醒安靜狀態(tài)下測(cè)呼吸功能(Pehn),每只小鼠適應(yīng)5分鐘,待數(shù)值穩(wěn)定后檢測(cè)7~10 min;(3)滴注24 h時(shí)處死動(dòng)物;取肺組織進(jìn)行病理分析。結(jié)果 小鼠在經(jīng)導(dǎo)管行氣管內(nèi)滴注后均能正常存活,解剖小鼠顯示EB組小鼠左肺均勻分布伊文斯蘭,右肺無(wú)明顯異常;插管成功率為100%,NS組和EB組小鼠呼吸功能無(wú)明顯差異(P值0.05),LPS組呼吸功能?chē)?yán)重?fù)p傷,與NS組和EB組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值0.001);NS組和EB組小鼠肺組織病理切片HE染色雙肺均無(wú)明顯病理學(xué)改變,LPS組小鼠肺出現(xiàn)嚴(yán)重急性肺損傷。結(jié)論 經(jīng)導(dǎo)管氣管內(nèi)滴注方法制作小鼠單側(cè)肺損傷模型,操作方便、成功率高、重復(fù)性好、用藥劑量精確可靠,能夠有效的實(shí)現(xiàn)小鼠肺部精準(zhǔn)定量、定位給藥,為臨床相關(guān)疾病的深入研究提供了一種改進(jìn)的有效而實(shí)用的方法。目的 建立一種穩(wěn)定、規(guī)范的鹽酸導(dǎo)致小鼠急性肺損傷模型(Acute lung injury,ALI),探索酸性物質(zhì)吸入性肺損傷的機(jī)制。方法 120只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為(hydrochloric acid,HCl)組和生理鹽水(normal saline,NS)組,每組分5個(gè)試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn),即30 min、2 h、6 h、12 h和24 h。經(jīng)導(dǎo)管滴注0.1M HCl/NS(1μl/g體重)至左肺,檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)(30 min除外)小鼠的呼吸功能、肺濕干重比值(wet/dry weight,W/D)、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的白細(xì)胞計(jì)數(shù)和蛋白濃度,觀察肺組織病理學(xué)改變;免疫組化研究ALI病程中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)變化;免疫印跡檢測(cè)肺組織中炎性因子的水平。結(jié)果 12 h HCl刺激組的呼吸功能?chē)?yán)重失常(P值0.01vs NS組),肺W/D明顯高于其他時(shí)間組(P值0.05)和對(duì)照組(P值0.01vs NS組);BALF蛋白濃度和白細(xì)胞總數(shù)在6 h HCl刺激組達(dá)到峰值(P值0.05vs其他時(shí)間組,P值0.01vs NS組);炎性因子IL-1β、TNF-α、NF-κB和IL-6在肺組織中表達(dá)隨HCl刺激時(shí)間逐漸升高,12 h后表達(dá)量降低;HCl刺激30 min即出現(xiàn)嗜中性粒細(xì)胞肺組織浸潤(rùn),巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞較晚出現(xiàn)。結(jié)論 本研究通過(guò)吸入稀鹽酸模擬吸入性肺炎小鼠模型,發(fā)現(xiàn)吸入性肺炎早期即可出現(xiàn)白細(xì)胞升高而巨噬細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)相較晚;大量炎性因子均參與了整個(gè)疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程。另外,本實(shí)驗(yàn)經(jīng)氣管單側(cè)滴注法獲得單側(cè)吸入性肺炎的模型,更符合臨床吸入性肺炎的特點(diǎn),為臨床深入研究吸入性肺炎制作了很好的動(dòng)物模型。
【關(guān)鍵詞】：單側(cè)氣管滴注 伊文斯蘭 脂多糖 鹽酸 吸入性急性肺損傷 小鼠
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R730.55;R-332
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 第一部分：經(jīng)氣管單側(cè)精確滴注法制作小鼠單側(cè)急性肺損傷模型的研究6-23
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1 前言10-11
• 2 材料與方法11-15
• 3 結(jié)果15-18
• 4 討論18-20
• 5 結(jié)論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 第二部分：鹽酸導(dǎo)致小鼠急性肺損傷機(jī)制研究23-56
• 中文摘要23-25
• 英文摘要25-27
• 1 前言27-28
• 2 材料與方法28-38
• 3 結(jié)果38-44
• 4 討論44-50
• 5 結(jié)論50
• 6 展望50-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 附錄56-57
• 致謝57-58
• 綜述58-69
• 參考文獻(xiàn)67-69

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本文編號(hào)：358026