發(fā)布時間：2020-11-08 06:56

　　 研究背景:結核病(TB)是由結核分枝桿菌(Mtb)感染引起的一種慢性免疫紊亂性疾病,由于缺乏理想的診療相關標志物,結核病的防控面臨嚴峻的挑戰(zhàn),這也是導致在全球范圍內結核病愈演愈烈的主要原因之一。環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)是新近發(fā)現(xiàn)的一種內源性RNA,其進化保守,具有組織和發(fā)育階段特異性,在細胞質中豐富而穩(wěn)定地存在。越來越多的研究提示circRNA參與了多種人體的病理、生理過程,可以作為腫瘤、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病潛在的診療標志物。circRNA在機體抗Mtb感染過程中的作用以及能否作為結核病診療標志物目前尚鮮見報道。研究目的:通過基因芯片技術檢測肺結核患者血漿中circ RNA的表達譜,篩選并鑒定具有成為結核病診斷標志物潛力的circRNA;探討篩選的circRNA與結核病病情嚴重程度的相關性及其在抗結核治療效果評估方面的能力,以期為結核病的診療提供新的標志物。研究方法:采用基因芯片技術分別檢測3例活動性肺結核患者和3例健康對照者血漿中circRNA的表達譜,挑選6條上調表達中差異最顯著的circRNA(hsa_circ_0009024,hsa_circ_0001953,hsa_circ_0008297,hsa_circ_0003528,hsa_circ_0003524和hsa_circ_0015879)在50例活動性肺結核患者和50例健康對照者血漿中進行實時熒光定量PCR(qRT-PCR)驗證。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析circRNA對肺結核的診斷價值。采用Spearman分析circRNA的表達水平與結核病患者疾病嚴重程度的相關性。收集120例活動性肺結核患者、100例健康體檢者、40例肺炎患者、40例COPD患者、40例肺癌患者的外周血,分離血漿樣本,采用qRT-PCR檢測各組血漿中hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024的表達,應用ROC曲線分析hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024診斷肺結核的敏感度和特異度。對25例接受規(guī)范抗結核治療的肺結核患者治療前及治療后第6個月血漿中hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達水平進行動態(tài)監(jiān)測。、研究結果:1.基因芯片檢測結果顯示,肺結核患者血漿中有61條circRNA存在差異性表達,其中上調43條,下調18條。qRT-PCR驗證結果顯示,與健康對照組相比,肺結核患者血漿中hsa_circ_0009024、hsa_circ_0001953、hsa_circ_0008297、hsa_circ_0003528、hsa_circ_0003524、hsa_circ_0015879表達均顯著上調,與芯片檢測結果一致。2.ROC曲線分析結果顯示,hsa_circ_0001953、hsa_circ_0009024、hsa_circ_0003528、hsa_circ_0003524,hsa_circ_0008297和hsa_circ_0015879診斷肺結核的曲線下面積(AUC)分別為0.856、0.808、0.768、0.715、0.692和0.676。相關性分析結果顯示,hsa_circ_0001953(P0.001)、hsa_circ_0009024(P=0.001)、hsa_circ_0008297(P=0.027)與患者疾病嚴重程度相關,而hsa_circ_0015879(P=0.135)、hsa_circ_0003528(P=0.336)和hsa_circ_0003524(P=0.578)與疾病嚴重程度無關性。3.擴大樣本量檢測可知,肺結核患者血漿hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達顯著高于健康對照組和疾病對照組(肺炎、COPD、肺癌患者),差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。ROC曲線分析結果顯示,血漿hsa_circ_0001953鑒別肺結核與健康人群的AUC為0.826,敏感度和特異度分別為69.17%和89.00%;血漿hsa_circ_0009024鑒別肺結核與健康人群的AUC為0.777,敏感度和特異度分別為60.00%和86.00%;聯(lián)合hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024鑒別肺結核與健康人群的AUC為0.915,敏感度為72.5%,特異度為96.00%。聯(lián)合hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024鑒別肺結核與疾病對照組患者的AUC為0.897,敏感度為79.17%,特異度為86.67%。與抗結核治療前相比,肺結核患者接受規(guī)范抗結核治療6月后血漿hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達水平顯著下降。結論:1.與健康志愿者相比,肺結核患者血漿中circRNA表達譜發(fā)生部分變化,提示circRNA可能在肺結核病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。2.Hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024在肺結核患者血漿中表達顯著升高,且與疾病嚴重程度正相關,在有效抗結核治療后二者表達水平顯著下降,有望成為肺結核診斷及療效監(jiān)測的潛在生物標志物。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R52;R440
【部分圖文】：

TB：肺結核；HC 健康對照圖 1 芯片掃描圖3.2.2 箱形圖分析通過箱形圖可觀察到芯片掃描后各組樣品熒光密度值的分布情況，經(jīng)標準化后 log2-ratios 接近同一水平（圖 2）。

箱形圖TB：肺結核；HC健康對照

第 3 章 結果13TB：肺結核；HC 健康對照圖 1 芯片掃描圖3.2.2 箱形圖分析通過箱形圖可觀察到芯片掃描后各組樣品熒光密度值的分布情況，經(jīng)標準化后 log2-ratios 接近同一水平（圖 2）。圖 2 箱形圖TB：肺結核；HC 健康對照3.2.3 分層群聚圖分析分層群聚圖結果顯示了肺結核患者組和健康對照組中差異表達 circRNA 的聚類情況（圖 3），紅色表示表達上調，綠色表示表達下調。
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本文編號：2874439