發(fā)布時(shí)間：2020-11-06 08:17

　　 目的:探究膿毒癥急性肺損傷肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞表達(dá)的縫隙連接蛋白43(Cx43)與肺泡氣-血屏障通透性的關(guān)系以及microRNA-206對(duì)膿毒癥急性肺損傷條件下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞表達(dá)的Cx43影響。方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)(sham)組、膿毒癥(CLP)組、CLP+Cx43抑制劑(Cx43-In)組和CLP+miRNA-206模擬物(miR-206-Mi)組。我們采用的是盲腸結(jié)扎穿孔的方法來(lái)準(zhǔn)備急性肺損傷模型。造模成功后6 h,取肺組織進(jìn)行HE染色,濕干重比(W/D)和支氣管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量測(cè)定,應(yīng)用免疫組化、Western blot檢測(cè)肺組織Cx43的表達(dá),RT-qPCR檢測(cè)肺組織miRNA-206和Cx43 mRNA的含量。在transwell板上培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,待培養(yǎng)成單層細(xì)胞后,用Cx43 mRNA抑制劑(siRNA-Cx43 mRNA)和miRNA-206模擬物預(yù)處理,再用脂多糖(LPS)進(jìn)行干預(yù),檢測(cè)下室中經(jīng)異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖(FITC-dextran)熒光強(qiáng)度來(lái)判斷單層細(xì)胞的通透性。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),探究miRNA-206是否靶向Cx43 mRNA的3′非編碼區(qū)來(lái)調(diào)節(jié)Cx43的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控肺泡氣-血屏障的通透性。結(jié)果:與sham組相比,CLP組肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺泡壁增厚,肺間質(zhì)充血、出血,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺間質(zhì)和肺泡腔水腫,且肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)淡紅色水腫液和中性粒細(xì)胞滲出,肺組織W/D、BALF蛋白含量增加(P0.05),同時(shí)Cx43的mRNA和Cx43蛋白的表達(dá)量也明顯增加(P0.05),miRNA-206表達(dá)量降低(P0.05);相對(duì)于CLP組,Cx43-In組和miR-206-Mi組肺組織的炎癥反應(yīng)減輕,W/D、BALE蛋白含量降低(P0.05),Cx43的mRNA和Cx43蛋白的表達(dá)量也明顯減少(P0.05)。此外,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,Cx43 mRNA的3′非編碼區(qū)存在miRNA-206的互補(bǔ)序列。結(jié)論:膿毒癥急性肺損傷條件下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞表達(dá)的Cx43增加,導(dǎo)致了肺泡氣-血屏障的通透性增加;microRNA-206通過(guò)標(biāo)靶Cx43的mRNA下調(diào)了Cx43的表達(dá),進(jìn)而降低了肺泡氣-血屏障通透性。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R459.7;R563
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法在體水平
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞水平
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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本文編號(hào)：2872889