目的:通過對貴州省某三甲醫(yī)院臨床分離的37株耐碳青霉烯類肺炎克雷伯桿菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)進(jìn)行耐藥基因型、耐藥表型檢測以及同源性分析,為預(yù)防和控制CRKP的感染和暴發(fā)流行及指導(dǎo)臨床合理用藥提供實驗依據(jù)。方法:1.以貴州省某三甲醫(yī)院2016年3月-2017年2月從患者痰液、血液、中段尿和腹水中分離的對碳青霉烯類抗生素耐藥的肺炎克雷伯菌株為研究對象,在Phoenixtm-100全自動微生物分析系統(tǒng)檢測進(jìn)行細(xì)菌鑒定后,參照美國臨床和微生物標(biāo)準(zhǔn)化實驗室(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)應(yīng)用改良Hodge試驗進(jìn)行表型驗證,并應(yīng)用EDTA-亞胺培南雙紙片協(xié)同試驗對CRKP菌株產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行篩查。2.根據(jù)CLSI推薦的微量肉湯稀釋法檢測細(xì)菌對13種抗生素的最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC),分析其耐藥譜。3.利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術(shù)檢測常見的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯桿菌耐藥基因(包括KPC-2、GES、IMP、VIM、NDM-1、OXA-48),擴(kuò)增產(chǎn)物雙向測序后與GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,確定CRKP菌株攜帶的耐藥基因型。4.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增CRKP菌株的7個管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB、tonB),進(jìn)行多位點序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)。5.利用MEGA軟件對菌株進(jìn)行進(jìn)化樹構(gòu)建,并通過eBURST3.0軟件對MLST結(jié)果進(jìn)行CRKP種群結(jié)構(gòu)分析。6.分析攜帶NDM-1+KPC-2基因的菌株感染者臨床資料,對ST11組與非ST11組患者的臨床資料進(jìn)行比較。利用SPSS17.0對所得到數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,年齡、住院時間等連續(xù)變量的組間比較采用t檢驗及非參數(shù)檢驗(Mann-Whiteney U法),其他分類變量項目的組間比較采用Fisher確切概率法檢驗(P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義)。結(jié)果:1.共收集貴州省某三甲醫(yī)院臨床分離的CRKP菌株50株,改良Hodge實驗表型驗證后,37株受試菌納入研究。2.37株CRKP中有3株細(xì)菌金屬酶檢測結(jié)果陽性,陽性率為10.8%。3.微量肉湯稀釋法結(jié)果顯示:37株CRKP對碳青霉烯類藥物(亞胺培南、美羅培南)呈現(xiàn)不同程度耐藥,范圍在4~256μg/ml。對于氨基糖苷類的慶大霉素、3代頭孢菌素頭孢曲松、以及臨床上常用的抗生素聯(lián)合β-內(nèi)酰胺酶抑制劑均出現(xiàn)高水平耐藥,而對于阿米卡星,耐藥率較低,為81.1%,耐藥范圍在1~256μg/ml;對于阿奇霉素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦,耐藥率均為97.3%。4.在37株CRKP中共檢出2種耐藥基因,分別是KPC-2基因檢出率為100%,其次有3株同時攜帶NDM-1基因,37株細(xì)菌均未檢出OXA-48,GES,IMP,VIM基因。5.MLST及分子遺傳學(xué)結(jié)果分析顯示37株CRKP菌株分為8個ST型,以ST11(25/37,67.6%)為主,其次為ST789(4/37,10.8%),ST524(2/37,5.4%);ST35、ST29、ST1066及ST244各1株。另外,ST2792(2/37,5.4%)為新ST型并被PubMlst數(shù)據(jù)庫確認(rèn)收錄。6.種群結(jié)構(gòu)分析提示8個ST型可分為5個克隆型(ST29,ST35,ST244,ST11,ST1066)和1個CC11克隆復(fù)合體(ST11、ST29、ST35、ST224、ST524、ST1066及ST2792),其中ST789為單個型。7.臨床數(shù)據(jù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),ST11型組與非ST11型組在年齡、性別、感染途徑、抗生素使用情況以及住院時間等項目上并沒有統(tǒng)計學(xué)差異;同時攜帶KPC-2及NDM-1基因的菌株感染患者僅有3例,共同的臨床表現(xiàn)主要為基礎(chǔ)疾病更為嚴(yán)重,住院期間進(jìn)行過侵入性操作和使用過多種抗生素聯(lián)合治療,而最終均死亡。結(jié)論:1.KPC-2是該三甲醫(yī)院分離的CRKP中最流行的耐藥基因型。2.ST11型為該醫(yī)院CRKP最流行的克隆型,新發(fā)現(xiàn)的ST2972與其為同一克隆系。在同一區(qū)域不同時間可能存在相同基因型或克隆群的CRKP的流行,臨床及相關(guān)檢驗科室需加強監(jiān)測,避免耐藥菌株的播散。3.細(xì)菌的克隆型并非影響其耐藥性及預(yù)后等臨床相關(guān)情況的重要因素。4.CRKP菌株耐藥性強,耐藥種類多,加強耐藥菌株的監(jiān)測刻不容緩。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

CRKP菌株在MH瓊脂平板中生長Fig.1-1TheCRKPstrainwasgrowingonMHplate挑取培養(yǎng)基中同一單一菌落分別接種于LB液體培養(yǎng)基37℃增菌過夜（圖

挑取瓊脂平板中單一菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中增菌過夜Fig.1-2PickasinglecolonyintoLBliquidmediumtogrowovernight

改良霍奇實驗

【參考文獻(xiàn)】

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1 豆清婭;鄒明祥;李春輝;李軍;胡詠梅;王海晨;吳安華;;耐亞胺培南肺炎克雷伯菌的耐藥機制研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2016年13期

2 杭欣;張波;;耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌易感因素分析[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2016年05期

3 毛彩萍;樊t

本文編號：2834913