研究背景和目的:鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii)是我國(guó)臨床上重要的非發(fā)酵條件致病菌,能在自然環(huán)境及醫(yī)院環(huán)境中廣泛存在并長(zhǎng)期存活,往往通過(guò)動(dòng)靜脈置管、氣管插管等侵入性操作引起患者感染,尤其是免疫力缺陷、低下或危重癥的患者,并以血流感染患者的死亡率最高。鮑曼不動(dòng)桿菌亦是院內(nèi)常見的引起生物膜相關(guān)感染的主要病原菌之一,生物膜是鮑曼不動(dòng)桿菌的一種重要毒力因子,而鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜的形成與耐藥性的關(guān)系仍有爭(zhēng)議,生物膜的形成對(duì)患者疾病進(jìn)展及預(yù)后的影響和生物膜形成的相關(guān)機(jī)制也值得我們進(jìn)一步研究探討。本課題為探討血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成特點(diǎn)及相關(guān)機(jī)制而進(jìn)行研究。方法:1.收集了2015-2017年間南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌83株,運(yùn)用結(jié)晶紫染色法評(píng)價(jià)其生物膜形成能力,從中分別選取一株生物膜形成陰性和一株生物膜形成強(qiáng)陽(yáng)性作為代表菌株,使用掃描電鏡驗(yàn)證其生物膜的形成并觀察生物膜的結(jié)構(gòu),并且比較和分析生物膜形成能力不同的鮑曼不動(dòng)桿菌的生長(zhǎng)曲線及生物膜形成生長(zhǎng)曲線。2.收集血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌83例患者的臨床資料,比較分析生物膜形成能力不同菌株的耐藥能力、科室分布、疾病表現(xiàn)、病情進(jìn)展及預(yù)后等,來(lái)探討鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力與患者臨床特點(diǎn)的相關(guān)性。3.研究分析83株血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成相關(guān)基因的攜帶情況,選取已有報(bào)道的10個(gè)生物膜形成相關(guān)基因,驗(yàn)證并分析其與鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力的關(guān)系。再通過(guò)PFGE和MLST分子分型的方法對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行系統(tǒng)性分型,從中選取PFGE分型和MLST分型相同但生物膜形成能力差異明顯的兩株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行全基因組的測(cè)序,從基因?qū)用嫔涎芯刻接懷鞲腥镜孽U曼不動(dòng)桿菌生物膜形成相關(guān)機(jī)制。結(jié)果:1.83株血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌中有62株菌(74.7%)能形成生物膜,其中17株菌(27.4%)表現(xiàn)為強(qiáng)陽(yáng)性,弱陽(yáng)性有45株。通過(guò)掃描電鏡可觀察到生物膜形成強(qiáng)陽(yáng)性的菌群周圍充滿大量絮狀粘液樣物質(zhì)并形成云霧狀的生物膜結(jié)構(gòu),而生物膜形成陰性的標(biāo)本幾乎只能看到裸露的菌體成簇聚集。生物膜形成能力不同的菌株其細(xì)菌的生長(zhǎng)速率無(wú)明顯差異,但菌株培養(yǎng)24h所測(cè)得的生物膜形成量的差異明顯,且最能反映其生物膜形成的能力強(qiáng)弱。2.83株血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌中,49株(59.0%)為泛耐藥菌(其中13株為全耐藥菌,占比15.7%),16株(19.3%)為多耐藥菌,泛耐藥菌和多重耐藥菌占全部菌株的絕大多數(shù)(78.3%),剩余18株(21.7%)為敏感菌。敏感菌株的生物膜形成率為94.4%,高于耐藥菌株的生物膜形成率的69.2%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而耐藥菌中的多耐菌株與泛耐菌株對(duì)比,生物膜形成能力無(wú)明顯差異,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們收集的這83株菌主要分布在ICU(49株)和燒傷科(11株),研究其對(duì)8類共19種臨床上常用的抗生素的耐藥性,所有菌株的耐藥率幾乎均在70%以上,生物膜形成陰性菌株對(duì)頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢呋辛和美羅培南這6種抗生素的耐藥率高于生物膜形成陽(yáng)性的菌株,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)于另外13種抗生素,菌株生物膜形成能力對(duì)其耐藥性無(wú)明顯影響,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將83株鮑曼不動(dòng)桿菌分為預(yù)后好和預(yù)后差兩組,發(fā)現(xiàn)中心靜脈置管、入住ICU、血小板、并發(fā)癥(惡性腫瘤、呼吸衰竭、腎功能衰竭)對(duì)患者預(yù)后有影響,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將這6種因素納入二元logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)對(duì)患者的預(yù)后均無(wú)明顯影響,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將83株鮑曼不動(dòng)桿菌分為生物膜陰性和生物膜陽(yáng)性兩組,納入多種臨床資料進(jìn)行對(duì)比分析,最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)生物膜形成能力與住院天數(shù)呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.生物膜形成陽(yáng)性的血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌的bap、csuC、csuD、csuE、ompA基因攜帶率均高于生物膜形成陰性菌,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),生物膜形成弱陽(yáng)性與強(qiáng)陽(yáng)性的鮑曼不動(dòng)桿菌的生物膜形成相關(guān)基因攜帶率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。通過(guò)過(guò)PFGE和MLST分子分型的方法對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行系統(tǒng)性分型,從中選取PFGE分型和MLST分型相同但生物膜形成能力差異明顯的兩株鮑曼不動(dòng)桿菌:樣本516(生物膜陰性)和632(生物膜強(qiáng)陽(yáng)性),經(jīng)三代測(cè)序結(jié)果顯示兩者存在堿基差異,分析兩者非同義突變差異基因以及各自功能,可能由于LysR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶、DNA結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的功能差異導(dǎo)致兩者生物膜形成能力的明顯差異,并存在其他基因功能未知或COG分類不明的非同義突變差異基因。結(jié)論:1.本研究收集的血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌大多數(shù)均具有較強(qiáng)的生物膜形成能力;鮑曼不動(dòng)桿菌菌株自身的生長(zhǎng)不影響生物膜形成能力。2.本研究顯示血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥現(xiàn)象非常嚴(yán)重,且細(xì)菌耐藥性與生物膜形成能力呈負(fù)相關(guān)。分析影響患者預(yù)后的影響因素時(shí),未發(fā)現(xiàn)與預(yù)后相關(guān)的具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,且鮑曼不動(dòng)桿菌的生物膜形成能力只對(duì)患者的住院天數(shù)有影響。3.鮑曼不動(dòng)桿菌不同菌株存在的基因差異可能導(dǎo)致功能差異,造成鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力差異,生物膜形成是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程,任何參與鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成過(guò)程的因素均可影響其生物膜的形成,其機(jī)制有待進(jìn)一步完善。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R515;R446.5
【部分圖文】：

生物膜形成強(qiáng)陽(yáng)性菌株及生物膜形態(tài)（×10000）

生物膜形成強(qiáng)陽(yáng)性菌株及生物膜形態(tài)（×100000）

圖 1-3 生物膜形成陰性菌株形態(tài)（×10000）.3 血流感染的鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)曲線分析.3.1 菌株的生長(zhǎng)曲線分析選取生物膜形成能力強(qiáng)（圖中紅色）和弱（圖中綠色）的菌株各 10 株生長(zhǎng)曲線見圖 1-4。全部菌株 4h 后進(jìn)入對(duì)數(shù)期，細(xì)菌急劇繁殖擴(kuò)增，18平臺(tái)期，由圖可見，無(wú)論生物膜形成能力強(qiáng)和弱的菌株，其菌株生長(zhǎng)顯差異，從而說(shuō)明了菌株自身的生長(zhǎng)不是其生物膜形成能力強(qiáng)弱的影因此，本文第三章將繼續(xù)研究影響鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力的相

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2810187