【摘要】：研究背景及目的腹瀉是全球重要公共衛(wèi)生問題,大多由被污染的食物和水源造成。由細(xì)菌、病毒和寄生蟲引起的感染性腹瀉,是發(fā)展中國(guó)家普遍存在的問題。中國(guó)是感染性腹瀉負(fù)擔(dān)較高的國(guó)家之一。2017年,我國(guó)共報(bào)告感染性腹瀉發(fā)病1471990例,其中丙類傳染病(除霍亂、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉)發(fā)病1284644例,遠(yuǎn)超過甲乙類腸道傳染病病例,可見對(duì)其他病原的檢測(cè)是十分必要的。但目前國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)腹瀉病原菌的檢測(cè)主要為霍亂弧菌、沙門菌和志賀菌等甲乙類傳染病病原,卻忽略了對(duì)其他病原的檢測(cè)。氣單胞菌(Aeromonas)是一類兼性厭氧、無芽孢、氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌,在自然界生態(tài)環(huán)境中廣泛存在,尤其是水環(huán)境中。1961年人類首次從糞便當(dāng)中分離到氣單胞菌,此后普遍被視為引起腹瀉的腸道致病菌。因臨床上對(duì)氣單胞菌缺乏重視,目前國(guó)內(nèi)關(guān)于氣單胞菌流行、毒力特征和耐藥情況的資料較為缺乏。浙江省地處沿海,有較長(zhǎng)的海岸線和豐沛的水資源,夏季溫暖濕潤(rùn)的氣候極有利于氣單胞菌的生長(zhǎng),增加了感染的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本研究收集了 2010年1月至2017年12月浙江省5家醫(yī)院急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本,進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè),以闡明氣單胞菌的流行現(xiàn)狀,為臨床上科學(xué)地開展氣單胞菌的常規(guī)檢測(cè)提供依據(jù);通過毒力基因的檢測(cè)明確氣單胞菌的毒力特征,為致病機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ);通過藥敏試驗(yàn)獲得腹瀉患者氣單胞菌的耐藥譜,為臨床氣單胞菌相關(guān)性腹瀉的治療提供依據(jù)。方法2010年1月至2017年12月,從我國(guó)浙江地區(qū)5家合作醫(yī)院收集急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本。用常規(guī)微生物檢驗(yàn)程序結(jié)合MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定對(duì)糞便標(biāo)本中常見腸道致病菌進(jìn)行分離培養(yǎng)及鑒定。用PCR方法和紙片擴(kuò)散法(K-B法)分別對(duì)分離的氣單胞菌菌株進(jìn)行毒力基因檢測(cè)和藥物敏感性試驗(yàn)。收集患者病例資料,分析氣單胞菌相關(guān)性腹瀉病例的臨床特征。結(jié)果1.2010年1月至2017年12月,共納入符合急性腹瀉定義的病例25853例。檢出率居前三位的細(xì)菌性病原為致瀉性大腸埃希菌(23.02%)、副溶血弧菌(7.05%)和氣單胞菌(5.10%)。2.在8747例進(jìn)行了氣單胞菌的培養(yǎng)及鑒定的病例中,男性與女性的檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);不同年齡組的檢出率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001),以60歲以上老年人群最高,為6.70%;不同季節(jié)的檢出率差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),夏季(6-8月)最高,為6.02%。3.糞便中僅分離到氣單胞菌的腹瀉病例占67.66%,在臨床上可出現(xiàn)腹痛(58.3%),嘔吐(19.3%)和發(fā)熱(12.9%)的癥狀。糞便主要為爛糊便(45.83%),其次為水樣便(29.69%)。分離到氣單胞菌混合其他病原的病例占32.34%,主要合并致瀉性大腸埃希菌(40例,11.98%)、副溶血弧菌(27例,8.08%)和類志賀鄰單胞菌(16例,4.79%)。4.636例氣單胞菌陽性患者糞便標(biāo)本中共分離到688株氣單胞菌,其中587例僅分離到一種氣單胞菌,46例分離到兩種氣單胞菌,3例分離到三種氣單胞菌。587株單一分離的氣單胞菌包括9個(gè)菌種,其中以維氏氣單胞菌(194株,28.20%)和豚鼠氣單胞菌(182株,26.45%)為主。5.688株氣單胞菌中,97.5%的氣單胞菌攜帶至少一種毒力基因。gcaT、fla、alt、acg、ela、act和lip在氣單胞菌中的檢出率較高(37%);aexT、lafA、tapA、ompAII、ahp和aaopH在氣單胞菌中的檢出率較低(8%);多數(shù)毒力基因在嗜水、豚鼠和維氏三種氣單胞菌中的檢出率存在顯著性差異(P0.05)。6.氣單胞菌對(duì)除外頭孢西丁(63.37%)、四環(huán)素(61.63%)和亞胺培南(60.47%)的其他抗菌藥物的敏感性大于79%;對(duì)17種抗菌藥物的耐藥率均在27%以下;而對(duì)作為腹瀉治療一線藥物的喹諾酮類藥物的敏感性(85%)、中介敏感性(10%)和耐藥性(5%)均較理想。氣單胞菌對(duì)多數(shù)抗菌藥物的耐藥性在嗜水、豚鼠和維氏氣單胞菌這三個(gè)菌種間存在顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.氣單胞菌檢出率位列細(xì)菌性病原的第三位,建議將氣單胞菌納入夏秋季節(jié)腹瀉病原常規(guī)檢測(cè)。2.氣單胞菌不同菌種的毒力基因攜帶和耐藥性存在差異,臨床需區(qū)別對(duì)待。3.氣單胞菌對(duì)喹諾酮類藥物敏感性高,可作為臨床首選。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R574.62;R446.5
【圖文】：

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文邐正文實(shí)驗(yàn)方法逡逑３．４．２分離培養(yǎng)逡逑在裝有標(biāo)本的Ｃａｒｒｙ－Ｂｌａｉｒ培養(yǎng)基中，沾取棉簽標(biāo)本，直接劃線接種血平板、逡逑麥康凱平板，３６±１°Ｃ培養(yǎng)１６？１８小時(shí)。再將棉簽置ＡＰＷ培養(yǎng)基管中，放３６士逡逑１°Ｃ增菌１２小時(shí)。取增菌后ＡＰＷ液接種慶大瓊脂平板和麥康凱平板，３６土１°Ｃ培逡逑養(yǎng)１６？１８小時(shí)。逡逑３．４．３菌落形態(tài)鑒定逡逑氣單胞菌在麥康凱平板上菌落均呈中等大小、濕潤(rùn)且無色半透明，在慶大瓊逡逑脂平板上呈黑褐色、不透明菌落，而在血平板上為中等大小、灰白色、光滑濕潤(rùn)逡逑突起、不透明的菌落，大多數(shù)具有溶血現(xiàn)象。逡逑

．分邐ＷＲ邐體積（（ｉｌ）逡逑邋ｘ邋Ｔａｑ邋Ｍａｓｔｅｒ邋Ｍｉｘ邋（Ｄｙｅ邋Ｐｌｕｓ）邐１２．５逡逑游引物邐１０）ｉＭ邐１．０逡逑游引物邐１0ｈＭ邐１．０逡逑ＮＡ邋模板邐５０－１００ｎｇ／Ｖｌ邐１．０逡逑ｄＨ２０邐９．５逡逑體積邐２５逡逑）邐ＰＣＲ擴(kuò)增條件：預(yù)變性９４°Ｃ５ｍｉｎ；變性９４°Ｃ邋３０ｓ，退火溫度３０ｓ，延伸０００ｂｐ／ｍｉｎ，３５邋個(gè)循環(huán)；最后邋７２邋°Ｃ邋延伸邋５ｍｉｎ。逡逑）核酸凝膠電泳：取�。保校茫耶a(chǎn)物，在１．５％的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，電壓泳時(shí)間為２邋５邋ｍｉ邋ｎ，凝膠成像系統(tǒng)拍照后分析結(jié)果。逡逑

序驗(yàn)證與結(jié)果分析：各毒力基因隨機(jī)選�。敝辏校茫谊栃援a(chǎn)物送至上海程股份有限公司進(jìn)行序列測(cè)定，引物自帶。測(cè)序結(jié)果經(jīng)美國(guó)國(guó)家生物心／局部序列比對(duì)基本檢索工具（Ｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｅｎｔｅｒ邋ｆｏｒ邋Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌａｔｉｏｎ邋／Ｂａｓｉｃ邋Ｌｏｃａｌ邋Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ邋Ｓｅａｒｃｈ邋Ｔｏｏｌ，邋ＮＣＢＩ邋／ＢＬＡＳＴ邋）比對(duì)確認(rèn)。逡逑氣單胞菌藥敏試驗(yàn)逡逑分離到的氣單胞菌菌株統(tǒng)一采用紙片擴(kuò)散法（Ｋｉｒｂｙ－Ｂａｕｅｒ）做體外藥物，藥敏紙片規(guī)格和對(duì)敏感、中介、耐藥的解釋標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)臨床與實(shí)員會(huì)ＣＬＳＩ推薦的標(biāo)準(zhǔn)（ＣＬＳＩ邋Ｍ４５－Ａ３）［２６］，見表３。逡逑

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本文編號(hào)：2789358