本文關(guān)鍵詞：新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：硫化氫(H2S)是生物體內(nèi)重要的氣體信號(hào)分子,參與多種病理生理過程。維持生物體內(nèi)硫化氫濃度平衡至關(guān)重要,硫化氫供體是提供外源性硫化氫的重要工具。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)是生物體內(nèi)重要的水解酶,催化谷氨�；鶑墓入赘孰幕蛘吆泄劝滨；衔镛D(zhuǎn)移到受體分子,其異常表達(dá)與腫瘤、糖尿病等疾病狀態(tài)有關(guān)。對(duì)GGT進(jìn)行選擇性、高靈敏、實(shí)時(shí)、可視化檢測,對(duì)于疾病診斷和病理生理研究具有重要意義。本論文主要開展了以下工作：1.以鄰硝基芐硫醇,4-羥甲基-7-甲氧基香豆素和乙酰丙酸為原料設(shè)計(jì)合成了一種新型光活化硫化氫供體,并通過1H NMR,13C NMR和MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。該硫化氫供體自身熒光微弱,在經(jīng)過365 nm強(qiáng)光照射后,快速釋放出硫化氫,同時(shí)釋放熒光物質(zhì)(7-甲氧基香豆素)乙酰丙酸甲酯。采用亞甲基藍(lán)法對(duì)光照釋放的硫化氫進(jìn)行檢測,并用色譜法對(duì)光裂解所釋放的(7-甲氧基香豆素)乙酰丙酸甲酯進(jìn)行了分析檢測。在365nm光照3-9 min時(shí)間檢范圍內(nèi),該硫化氫供體的熒光強(qiáng)度與釋放的硫化氫量呈動(dòng)態(tài)學(xué)相關(guān)性。通過監(jiān)測熒光強(qiáng)度的變化,可間接監(jiān)測硫化氫的釋放過程。2.以4-氯-7-硝基苯并呋咱和谷胱甘肽為原料設(shè)計(jì)合成了一種新的GGT熒光探針,并用MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。此探針在475nm激發(fā)光激發(fā)下,發(fā)出微弱熒光；經(jīng)GGT作用后,相同的激發(fā)波長下,探針溶液發(fā)出明亮的綠色熒光,最大發(fā)射波長為538nm。通過紫外光譜實(shí)驗(yàn),結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)工作,推測探針對(duì)酶的響應(yīng)機(jī)理為酶切谷氨酰胺鍵之后自發(fā)進(jìn)行S,N-交換。該探針在生理pH條件下具有高穩(wěn)定性、高選擇性,其熒光響應(yīng)信號(hào)與GGT的濃度呈線性相關(guān),線性響應(yīng)范圍為為1-40 U/L,檢測限為0.13 U/L。激光共聚焦成像實(shí)驗(yàn)表明,該探針可用于活細(xì)胞中GGT的可視化檢測。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫供體 光敏感 香豆素 熒光探針 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3;R446.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-24
• 1.1 硫化氫供體研究進(jìn)展10-15
• 1.1.1 硫化氫供體類型10-14
• 1.1.2 硫化氫供體的藥理作用14-15
• 1.2 酶熒光探針研究進(jìn)展15-22
• 1.2.1 熒光探針概述15-18
• 1.2.2 基于還原反應(yīng)的酶熒光探針18-20
• 1.2.3 基于氧化反應(yīng)的酶熒光探針20
• 1.2.4 基于水解反應(yīng)的酶熒光探針20-22
• 1.3 課題的提出與研究內(nèi)容22-24
• 第2章 自報(bào)告型光活化硫化氫供體的合成及性能研究24-39
• 2.1 前言24-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分25-31
• 2.2.1 儀器與試劑25
• 2.2.2 自報(bào)告型光活化硫化氫供體的合成25-30
• 2.2.3 自報(bào)告型光活化硫化氫供體的性能研究30-31
• 2.3 結(jié)果與討論31-37
• 2.3.1 光照對(duì)供體Cou-D-H_2S特征光譜的影響31-32
• 2.3.2 光照時(shí)間對(duì)供體Cou-D-H_2S熒光強(qiáng)度變化的影響32-33
• 2.3.3 亞甲基藍(lán)法檢測硫化氫的標(biāo)準(zhǔn)曲線33
• 2.3.4 光照時(shí)間對(duì)供體Cou-D-H_2S釋放硫化氫的影響33-35
• 2.3.5 光照下供體Cou-D-H_2S的硫化氫釋放量和熒光強(qiáng)度的關(guān)系35-36
• 2.3.6 供體Cou-D-H_2S的光活化機(jī)理驗(yàn)證36-37
• 2.4 小結(jié)37-39
• 第3章 新型γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的合成及性能研究39-49
• 3.1 前言39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分39-42
• 3.2.1 儀器與試劑39-40
• 3.2.2 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的合成40
• 3.2.3 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的光譜性能測試40-42
• 3.3 結(jié)果與討論42-48
• 3.3.1 探針NBD-GSH對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶響應(yīng)的特征熒光光譜42-43
• 3.3.2 探針NBD-GSH對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的響應(yīng)動(dòng)力學(xué)43-44
• 3.3.3 探針NBD-GSH對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的活性依賴性44-45
• 3.3.4 探針NBD-GSH對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的響應(yīng)特異性45-46
• 3.3.5 PH對(duì)探針N-BD-GSH穩(wěn)定性的影響46
• 3.3.6 探針NBD-GSH對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶響應(yīng)機(jī)理驗(yàn)證46-47
• 3.3.7 探針NBD-GSH在活細(xì)胞中對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的檢測47-48
• 3.4 小結(jié)48-49
• 總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-63
• 附錄A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的論文目錄63-64
• 附錄B 部分化合物譜圖64-71
• 致謝71

  本文關(guān)鍵詞：新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：253781