【摘要】：赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)主要是由青霉屬和曲霉屬代謝的次級(jí)產(chǎn)物,對(duì)人畜有強(qiáng)致癌性。因此,各國(guó)普遍加強(qiáng)了對(duì)OTA的監(jiān)管。免疫傳感器作為一種重要的分析手段,在OTA檢測(cè)中具有舉足輕重的地位。本研究采用金納米粒子(Gold nanoparticles,GNPs)和PEG聚合物(Mal-PEG-NH2)于金電極(Gold electrode,GE)表面合成功能化PEG聚合物刷,使anti-OTA-McAb與聚合物刷共價(jià)偶聯(lián),并通過(guò)特異性結(jié)合OTA噬菌體多肽模擬表位,建立了基于免疫學(xué)競(jìng)爭(zhēng)原理的OTA傳感器。主要研究?jī)?nèi)容如下:1基于OTA噬菌體多肽模擬表位建立ELISA分別以O(shè)TA噬菌體多肽模擬表位與人工抗原為免疫元件建立了ELISA。測(cè)得以人工抗原/anti-OTA-McAb建立的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.20~13.52ng/mL,半抑制濃度(Half inhibition concentration,IC50)為1.66 ng/mL;以O(shè)TA噬菌體模擬表位/anti-OTA-McAb建立的Phage-ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性范圍為0.01~0.57 ng/mL,IC50為0.09 ng/mL。2基于OTA噬菌體多肽模擬表位建立傳感器2.1 GNPs-傳感器采用循環(huán)伏安(cyclic voltammetry,CV)一步沉積法在金電極表面修飾GNPs,將3-巰基丙酸(3-mercaptopropionic acid,MPA)共價(jià)鍵與GNPs偶聯(lián),接著固定anti-OTA-McAb于電極表面。從而制備了GNPs-免疫傳感器,其線性范圍0.15~1.84 pg/mL,IC50值為0.53 pg/mL,最低檢測(cè)限(Limit of detection,LOD)為20.48 fg/mL。2.2 GNPs-Mal-PEG-NH2-免疫傳感器以電沉積的方式將GNPs沉積在金電極表面,再通過(guò)層層自組裝依次將MPA、半胱氨酸(Cysteine,Cys)和Mal-PEG-NH2修飾在電極上作為固定抗體的電極基質(zhì),制備了GNPs-Mal-PEG-NH2免疫傳感器。該傳感器的IC50為81.85 fg/mL,線性范圍9.51~703.84 fg/m L,LOD為2.05 fg/mL,與GNPs-免疫傳感器相比,靈敏度提高了近10倍。該傳感器與AFB1、DON、ZEN和FB1無(wú)明顯交叉反應(yīng)。在啤酒和玉米樣品中的加標(biāo)回收率分別為99.33%~107.30%和89.61%~107.40%。3啤酒樣品的檢測(cè)分別采用制備的GNPs-Mal-PEG-NH2-免疫傳感器、市售ELISA試劑盒及高效液相色譜對(duì)25個(gè)啤酒樣品中的OTA含量進(jìn)行檢測(cè),未發(fā)現(xiàn)有OTA超標(biāo)的樣品,三者檢測(cè)結(jié)果基本一致。
【圖文】：

毒素的研究進(jìn)展霉毒素理化性質(zhì)素（Ochratoxins）是指一組結(jié)構(gòu)相似的次級(jí)代謝物，主要產(chǎn)生的，赭曲霉毒素包括四種，分別為赭曲霉毒素 A（Och曲霉毒素 B、赭曲霉毒素 C、赭曲霉毒素 D，其中 OTA 的主要作用與人及動(dòng)物腎臟和肝臟[1]。一種結(jié)晶化合物，無(wú)色，分子量為 403.8，分子式 C20H18C.4~7.5)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖 1-1 所示[2]。OTA 易溶于有機(jī)溶液，不易溶于水。OTA 為脂溶性真菌毒素，溶解于甲醇溶保存一年，高溫環(huán)境下仍具有良好穩(wěn)定性，日常生活中的 OTA 含量的 20%[3]。

從而輸出與待測(cè)物變化量有關(guān)的信號(hào)，，檢測(cè)數(shù)據(jù)由傳感器的終端計(jì)算器快速處理并直接顯示。其工作原理如圖1-2 所示。由于其特異性的識(shí)別元件是抗原或抗體，因而具有高度特異性，是檢測(cè)待測(cè)物信息的準(zhǔn)確有效的分析工具[41]。圖 1-2 電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)原理Fig1-2 The schemiatic diagram of immune sensor1.2.2 分類電化學(xué)免疫傳感器根據(jù)免疫分析過(guò)程中是否使用標(biāo)記物分為：標(biāo)記型的免疫傳感器和非標(biāo)記型免疫傳感器；按照測(cè)量信號(hào)的不同則可分為：電位型、電導(dǎo)型、電容型和電流型四種。其中研究最為成熟，應(yīng)用最廣泛的為電流型免疫傳感器[42]。（1）電流型（安培分析）免疫傳感器電流型免疫傳感因測(cè)量形式為電流的輸出而得名，在保持電極和反應(yīng)溶液電壓恒定的條件下，待測(cè)物被氧化或還原輸出電流以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。按照分析過(guò)程分類屬于一種標(biāo)記性的分析方法，堿性磷酸酶、辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖氧化酶、尿素水解酶等通常被作為標(biāo)記物。首先將酶標(biāo)記在抗體(或抗原)上，然后采用夾心
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TP212

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2517860