目的構(gòu)建用于轉(zhuǎn)化變形鏈球菌的 luxS 基因缺失的同源重組克隆載體。方法利用哈氏弧菌（Vibrio harveyi）BB170作為報(bào)告菌株,對(duì)變形鏈球菌在不同生長(zhǎng)時(shí)期誘導(dǎo)生物發(fā)光的能力進(jìn)行測(cè)定,然后分別 PCR 擴(kuò)增變鏈菌 luxS 基因上下游片段及質(zhì)粒 PJT10的紅霉素抗性基因片段,采用分子克隆技術(shù)將基因片段依次雙酶切后連接入載體 pUC19,構(gòu)建 luxS 基因缺失的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)篩選后,抽提重組質(zhì)粒,進(jìn)行酶切鑒定。結(jié)果變鏈菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株可誘導(dǎo)哈氏弧菌 BB170的生物發(fā)光現(xiàn)象,提示變鏈菌中存在 AI-2數(shù)量感應(yīng)通路。構(gòu)建的重組質(zhì)粒pUCluxKO 經(jīng) PstI-BamHI 雙酶切,產(chǎn)物電泳在大約1000 bp 和5000 bp 處各見一條特異條帶;經(jīng)BamHI-KpnI 雙酶切,產(chǎn)物電泳在大約1500 bp 和4500 bp 處各見一條特異條帶;經(jīng) KpnI-EcoRI 雙酶切后,產(chǎn)物電泳在大約1000 bp 和5000 bp 處各見一條特異條帶。結(jié)論變鏈菌 luxS 基因同源重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,為進(jìn)一步通過(guò)同源重組法構(gòu)建變鏈菌 luxS 基因缺陷株... 

【文章頁(yè)數(shù)】：0 頁(yè)


本文編號(hào)：3713248