目的：國(guó)醫(yī)大師周仲瑛教授基于癌毒理論總結(jié)的消癌解毒方在臨床中已證實(shí)其卓越的療效,周教授基于癌毒理論治療各組腫瘤最常用的君藥為白花蛇舌草,其在各腫瘤組方中使用頻率高達(dá)74%,尤其在消化系統(tǒng)腫瘤如結(jié)腸癌中,白花蛇舌草更是一直居于周仲瑛教授抗癌組方最重要的地位。中藥抗癌雖然在結(jié)腸癌治療中居于較重要地位,但即使像白花蛇舌草這樣一味抗癌超級(jí)明星中藥,其在抑制腫瘤生長(zhǎng)中的作用及機(jī)制仍不清楚,本研究擬探討白花蛇舌草抗結(jié)腸癌的作用及其分子機(jī)制。方法：結(jié)腸癌HCT-116、Lovo、HT-29和DLD-1細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù),結(jié)腸癌原代細(xì)胞來(lái)自無(wú)錫市人民醫(yī)院手術(shù)切除標(biāo)本。細(xì)胞培養(yǎng)于并維持在RPMI/DMEM培養(yǎng)基中,加入10%的FBS,青霉素/鏈霉素（1:100, Sigma）,培養(yǎng)在37℃ CO2培養(yǎng)箱中,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞給予白花蛇舌草濃度（Ctrl、10、25、50、 200μg/ml）和指定的時(shí)間（0、6h、24h、48h、72h、96h）,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),運(yùn)用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞存活率,同時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色,計(jì)算活細(xì)胞率；運(yùn)用組蛋白DNA-ELISA及Annexin... 

【文章來(lái)源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
前言
    參考文獻(xiàn)
第一章 理論研究
    第一節(jié) “癌毒”理論及醫(yī)治大法探討
        1 “癌毒”理論
        2. 癌毒的醫(yī)治方法
        參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) 白花蛇舌草在癌毒辨治中的地位
        2.1 白花蛇舌草
        2.2 白花蛇舌草藥用價(jià)值
        2.3 白花蛇舌草與癌毒辨治
        2.4 白花蛇舌草與腫瘤醫(yī)治
        參考文獻(xiàn)
    第三節(jié) 中藥抗腫瘤機(jī)制研究新進(jìn)展
        3.1 干預(yù)腫瘤增殖周期,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬
        3.2 活化AMPK通路
        3.3 抑制腫瘤血管生成
        3.4 抑制細(xì)胞外基質(zhì)的降解
        3.5 抗多藥耐藥作用
        3.6 Hedgehog信號(hào)通路
        參考文獻(xiàn)
第二章 實(shí)驗(yàn)研究
    第一節(jié) 白花蛇舌草誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡及程序性壞死
        1. 材料與方法
        2. 結(jié)果
        3. 討論
        4. 結(jié)論
        5. 參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) 白花蛇舌草提取物(OLDENLANDIA DIFFUSA EXTRACTS)活化AMPK的作用
        1. 材料與方法
        2. 結(jié)果
        3. 討論
        4. 結(jié)論
        5. 參考文獻(xiàn)
    第三節(jié) 白花蛇舌草提取物活化AMPK的下游通路及機(jī)制研究
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)
            1.3 結(jié)腸癌組織原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 MTT法檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率
            1.5     ELISA檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡
            1.6 臺(tái)盼藍(lán)（trypan blue)染色檢測(cè)細(xì)胞死亡
            1.7 磷脂酰絲氨酸外翻分析流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 (AnnexinV法）
            1.8 LDH分析法檢測(cè)細(xì)胞死亡率
            1.9 線粒體免疫共沉淀(Mitochondrial immunoprecipitation)
            1.10 短發(fā)夾RNA(shRNA)及穩(wěn)定細(xì)胞的選擇
            1.11 AMPK顯性失活突變細(xì)胞制備
            1.12 Western Blot(蛋白質(zhì)印跡)
            1.13 免疫組化技術(shù)
            1.14 在體裸鼠結(jié)腸癌種植模型
            1.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        2 結(jié)果
            2.1 免疫共沉淀驗(yàn)證白花蛇舌草提取物激活HCT-116細(xì)胞AMPK-p53通路
            2.2 白花蛇舌草提取物激活HCT-116結(jié)腸癌細(xì)胞中AMPK-p53信號(hào)通路
            2.3 p53 RNAi和DN-p53阻斷白花蛇舌草提取物誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡
            2.4 白花蛇舌草提取物激活原代結(jié)腸癌細(xì)胞中AMPK-p53信號(hào)通路
            2.5 白花蛇舌草提取物對(duì)裸鼠HCT-116結(jié)腸癌移植瘤有明顯抑制作用
            2.6 白花蛇舌草提取物作用的裸鼠移植瘤內(nèi)AMPK-p53通路蛋白表達(dá)
            2.7 激活A(yù)MPK誘導(dǎo)促癌基因(EGFR、PDGFRα/β和FSCN1)溶酶體轉(zhuǎn)位和降解
        3 討論
        4 結(jié)論
        5 參考文獻(xiàn)
結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
本研究的不足
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3197290