黑曲霉(Aspergillus niger)是一類常見的曲霉屬真菌,作為一種典型的植物病原微生物,它普遍存在于各種糧食產(chǎn)品、園藝果蔬以及土壤里,可直接導(dǎo)致食物、谷物和果蔬的霉腐變質(zhì),每年對世界各國造成難以估量的經(jīng)濟損失。關(guān)于黑曲霉的致病機理及防治策略也一直是科研工作者們持續(xù)探尋的問題。而近些年,關(guān)于花青苷在抑制病原微生物方面的作用逐漸引起人們的關(guān)注,花青苷是植物中常見的次生代謝物,具有很強的抗氧化能力,與植物的抗逆及各項生理活動息息相關(guān),并且對人類的健康也有著諸多益處;已經(jīng)有相關(guān)研究報道證明了花青素可以有效抵抗一些病原微生物的侵害,然而,花青苷能否抑制黑曲霉及其機制,尚不清楚。因此本文探究了紅皮梨中花青素對黑曲霉侵染的抑制作用,并進一步揭示了 WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控紅皮梨果皮中花青苷合成的分子機制。具體內(nèi)容如下:鑒于黑曲霉是導(dǎo)致水果腐爛的一類主要病原微生物,本文使用了本試驗室保存的野生型黑曲霉菌株及其基因缺失突變體(包括ΔcatA、ΔcpefB、ΔsodC,而catA cpeB和sodC基因已被證實與黑曲霉的抗氧化代謝相關(guān),直接影響黑曲霉的致病力)在梨果實中進行了接種試驗,發(fā)現(xiàn)在花青苷...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
第一章: 引言
    1.1. 植物真菌病害研究概述
        1.1.1 病原微生物對植物的侵害
        1.1.2 國內(nèi)植物真菌病害研究現(xiàn)狀
        1.1.3 黑曲霉概述
    1.2. 植物的免疫防御及抗病機制
    1.3 花青苷概述
    1.4 花青苷生物合成和轉(zhuǎn)運的分子機制
        1.4.1. 花青苷生物合成的途徑
        1.4.2 參與花青苷生物合成的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.3 花青苷的轉(zhuǎn)運與儲存
    1.5 課題研究的目的、意義及內(nèi)容
        1.5.1 課題研究的目的和意義
        1.5.2 課題研究的主要內(nèi)容
第二章: 梨果皮中花青苷的抑菌研究
    2.1 試驗材料、試劑及儀器
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 不同品種梨果皮花青苷的提取與測定
        2.2.2 水浸提取法提取梨果皮花青苷
        2.2.3 大腸桿菌和黑曲霉的菌懸液配制
        2.2.4 抑菌率—平板菌落計數(shù)法
        2.2.5 不同品種梨果實抗侵染能力的檢測
        2.2.6 梨果皮侵染部位總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.7 RT-qPCR分析侵染后梨果實花青苷相關(guān)關(guān)鍵基因的表達量
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同品種間梨果皮花青苷含量測定結(jié)果分析
        2.3.2 紅茄梨果皮中花青苷的提取
        2.3.3 梨果皮中花青苷的體外平板抑菌試驗
        2.3.4 不同品種間梨果實抗侵染能力的分析
        2.3.5 侵染后梨果皮中花青苷合成相關(guān)基因的表達量分析
    2.4 本章小結(jié)
第三章: 花青苷合成關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的功能驗證
    3.1 試驗材料、試劑及儀器
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗方法
        3.2.1 WRKYs轉(zhuǎn)錄因子的生物信息學(xué)分析
        3.2.2 不同品種的梨果皮中花青苷的提取及含量測定
        3.2.3 梨果皮中總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 不同品種的梨果皮中花青苷生物合成轉(zhuǎn)運相關(guān)基因表達量分析及其與花青苷含量相關(guān)性分析
        3.2.5 用于驗證基因功能的植物材料的培養(yǎng)
        3.2.6 PyWRKY26和PyWRKY31等關(guān)鍵基因的瞬時表達載體構(gòu)建及菌株轉(zhuǎn)化
        3.2.7 煙草葉片和草莓果實的瞬時轉(zhuǎn)化試驗
        3.2.8 煙草葉片與草莓果實的色差分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和生物信息學(xué)分析篩選候選WRKY基因
        3.3.2 驗證梨中青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子與花青苷積累的相關(guān)性
        3.3.3 PyWRKY26和PyWRKY31基因的克隆及pSAK277載體的雙酶切
        3.3.4 PyWRKY26和PyWRKY31基因瞬時表達載體的菌落鑒定及菌株轉(zhuǎn)化
        3.3.5 PyWRKY26/PyWRKY31等花青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)花青苷在煙葉中的積累
        3.3.6 PyWRKY26/PyWRKY31等花青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)花青苷在草莓中的積累
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PyWRKY26調(diào)節(jié)花青苷生物合成的分子機制
    4.1 試驗材料、試劑及儀器
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 試驗方法
        4.2.1 用于基因功能分析的植物材料的培養(yǎng)
        4.2.2 草莓果實中總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        4.2.3 熒光定量PCR反應(yīng)及引物的設(shè)計
        4.2.4 梨果實基因組DNA的提取
        4.2.5 雙熒光素酶報告系統(tǒng)測定煙草葉片驗證轉(zhuǎn)錄因子激活效應(yīng)
        4.2.6 酵母單雜交系統(tǒng)分析
        4.2.7 熒光素酶互補試驗分析
        4.2.8 酵母雙雜交系統(tǒng)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 熒光定量分析草莓果實中花青苷合成及轉(zhuǎn)運基因的表達量
        4.3.2 雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物的相互作用
        4.3.3 驗證PyWRKY26和PybHLH3對PyMYB114啟動子的激活活性
        4.3.4 通過酵母單雜交系統(tǒng)確認PyMYB114啟動子的靶向基因
        4.3.5 熒光素酶互補試驗驗證轉(zhuǎn)錄因子PybHLH3與PyWRKY26的相互作用
        4.3.6 通過酵母雙雜交系統(tǒng)驗證PybHLH3與PyWRKY26的相互作用
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況



本文編號：4011612