本文關(guān)鍵詞：microRNA-216a及其靶基因JAK2、CSK在胰腺癌中的表達及臨床意義

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【摘要】：背景與目的胰腺癌是一種侵襲性極高的消化道腫瘤,其發(fā)病隱匿,診斷明確時往往已處于中晚期,并且治愈率極低,5年生存率僅有1-4%,預后差[1]。目前尚未發(fā)現(xiàn)一種能夠準確判斷胰腺癌的標志物。因胰腺癌惡性程度極高,且臨床的診治手段目前效果均不佳,我們迫切需要發(fā)展診治該腫瘤的新方法。隨著分子生物學理論及技術(shù)的發(fā)展,在此領(lǐng)域內(nèi)探討胰腺癌的發(fā)病機理和探求新的診斷和治療手段成為最近期間的熱點。有最新研究表明胰腺癌的病程演化至少經(jīng)歷了20余年[2],如果能早于臨床影像學提早診斷出胰腺癌,在早期就對其發(fā)展進行干預,將有可能從根本上使胰腺癌的治療和預后得到一定程度的改觀。目前據(jù)有關(guān)文獻報道[3],許多種腫瘤標志物將被用于胰腺癌的診斷,但其特異性和敏感性都不太理想,尤其對于早期診斷意義較小。專家們對胰腺癌的研究,主要集中于在胰腺癌早期發(fā)病時發(fā)生變化的特殊的標志物方面及對分子生物學的研究方面。對于基因芯片技術(shù),研究者可以進行多基因聯(lián)合檢測,可以提供新的方向在基因的診斷上;也可以快捷、高效地分析基因在胰腺癌標本中表達所具有的潛在價值,從而使它們在診斷疾病、判斷預后以及制定治療方案方面的應用價值得到確定[4]。隨著國內(nèi)外研究人員對惡性腫瘤越來越多的了解,發(fā)現(xiàn)miRNA(微小RNA)就是一種小分子,它與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。最近幾年來,研究人員越來越重視對非編碼RNA的研究,發(fā)現(xiàn)miRNA是一種很重要的非編碼RNA;miRNAs由大小約21-23個堿基的單鏈小分子組成,是由Dicer酶加工單鏈RNA而成,而此單鏈RNA是由具有大約70個-90個堿基大小發(fā)夾結(jié)構(gòu)組成[5-6]。Lin-4和let-7是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA,最早發(fā)現(xiàn)于線蟲中,隨后在果蠅、植物、人類等多種生物中也逐漸發(fā)現(xiàn)和鑒別出數(shù)百種miRNA。在研究過程中,專家們發(fā)現(xiàn)miRNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,大量研究表明[7],micro RNA調(diào)節(jié)靶基因的方式是抑制或降解靶基因miRNA的翻譯來完成的;參與調(diào)節(jié)很多種生物學信號通路。miRNA參與到生命活動的各個環(huán)節(jié),從細胞的生成到蛋白質(zhì)的合成、能量的代謝,以及我們?nèi)梭w神經(jīng)的傳遞等。因此尋求一種敏感性和特異性均相對較高的標志物將對胰腺癌的早期診斷和預后的判斷產(chǎn)生重大意義。對miRNA進行深入的研究,有助于我們對癌癥的提前的診斷,并且在疾病發(fā)現(xiàn)后進行積極有效的治療上有很大的幫助。有研究發(fā)現(xiàn)[8-10]miR216a在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等發(fā)病中起著重要的作用,而在胰腺癌中研究較少。有研究提示miR216a在胰腺癌中屬于抑癌基因,本研究主要針對胰腺癌組織及癌旁組織,驗證micro RNA-216a及其靶基因JAK2、CSK在胰腺癌中的作用機制及臨床意義。目的通過檢測胰腺癌、癌旁正常石蠟包埋組織中miR216a的表達,檢測miR216a的作用靶基因JAK2、CSK的蛋白表達水平,探討miR216a及JAK2、CSK蛋白表達水平與臨床病理特征的關(guān)系,及其相關(guān)性。方法收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院2011年3月至2014年11月間因胰腺癌行手術(shù)切除的石蠟包埋組織45例,并收集癌旁正常組織45例作為對照。按照3um厚度切片3um,HE染色,病理組織學診斷均為胰腺導管腺癌,所有病例術(shù)前均未接受放、化療。應用鎖定核酸原位雜交法測定64例胰腺癌及其配對的癌旁正常組織中miR216a的表達情況,免疫組織化學法檢測JAK2、CSK蛋白的表達情況,并分析三者之間的相關(guān)性,及其各自與胰腺癌臨床病理指標的關(guān)系。采用SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析,miR216a、JAK2、CSK三者之間的關(guān)系應用Spearman相關(guān)分析法,檢驗水準a=0.05,P0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.鎖定核酸原位雜交法顯示miR216a陽性染色呈藍色,定位于細胞漿或細胞核,在胰腺癌組織中多為弱陽性(附圖ABC);miR216a在胰腺癌組織中的陽性表達率為37.8%(17/45),在癌旁正常組織的陽性表達率為71.1%(32/45),差異具有統(tǒng)計學意義(c2=10.080,P0.05);免疫組化法顯示JAK2蛋白染色均定位于胞漿,陽性染色為呈棕黃色或棕褐色(附圖DEF),JAK2蛋白在胰腺癌組織、癌旁正常組織中蛋白的陽性表達率分別為60%(27/45)、35.6%(16/45)),差異具有統(tǒng)計學意義(c2=5.388,P0.05);免疫組織化學法染色顯示CSK蛋白染色均定位于胞漿,陽性染色為呈棕黃色或棕褐色(附圖GHI),在胰腺癌組織中及癌旁正常組織中的陽性表達率分別為17.8%(8/45)、73.3%(33/45),差異仍具有統(tǒng)計學意義(c2=27.999,P0.05)。miR216a的表達水平與胰腺癌的TNM分期有關(guān),而與患者性別、年齡、腫瘤分化的程度,局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移、遠處的轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05);JAK2蛋白、CSK蛋白的表達均和胰腺癌的分化程度有關(guān)系,而與患者年齡、性別、TNM分期,局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05)。2.miR216a在胰腺癌TNM I-II期、TNM III-IV期的陽性表達率為34.8%(8/23),9.1%(2/22),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);miR216a的表達與患者的性別、年齡、分化程度、門靜脈或腹腔神經(jīng)侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。JAK2在高、中、低分化胰腺癌細胞中的陽性表達率分別為20%(1/5)、68.9%(20/29)、81.8%(9/11);CSK在高、中、低分化胰腺癌細胞中的陽性表達率分別為80%(4/5)、20.7%(6/29)、27.2%(3/11),差異均具有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。JAK2、CSK與胰腺癌患者的性別、年齡、TNM分期、門靜脈或腹腔神經(jīng)侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。(表2)3.spearman相關(guān)性分析顯示,miR216a在胰腺癌組織中的表達水平與JAK2呈負相關(guān)(r=-0.436,P0.05),miR216a在胰腺癌組織中的表達水平與CSK呈正相關(guān)(r=0.223,P0.05),JAK2與CSK在胰腺癌組織中的表達呈正相關(guān)(r=0.443,P0.05)。結(jié)論1.miR216a在胰腺癌組織中表達下調(diào),JAK2在胰腺癌組織中表達上調(diào),CSK在胰腺癌組織中表達下調(diào),miR216a可能通過靶向調(diào)節(jié)JAK2、CSK的表達,對胰腺癌的發(fā)病起到一定的抑制作用。2.miR216a與胰腺癌TNM分期相關(guān),胰腺癌的TNM分期越高,miR216a表達越低;JAK2與胰腺癌的分化程度存在一定的關(guān)系,JAK2蛋白表達水平越高,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的惡性程度越高;CSK蛋白與胰腺癌的分化程度有關(guān)系,CSK蛋白表達越低,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的惡性程度越高。3.miR216a的表達與JAK2蛋白呈負相關(guān),而與CSK蛋白表達呈正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 miR216a JAK2 CSK 鎖定核酸原位雜交 免疫組織化學
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-14
• 中英文略縮詞對照表14-15
• 前言15-18
• 材料和方法18-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-35
• 結(jié)論35-36
• 附圖36-37
• 參考文獻37-43
• 綜述 胰腺癌相關(guān)基因的研究進展43-60
• 參考文獻55-60
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

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本文編號：960021