本文關(guān)鍵詞：黃梁木蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因克隆及其表達(dá)模式分析

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【摘要】：黃梁木(Neolamarckia cadamba),又稱(chēng)團(tuán)花樹(shù),茜草科團(tuán)花屬樹(shù)種,在食用、藥用以及工業(yè)用途等眾多方面都發(fā)揮著不容小覷的作用,是一種重要的速生經(jīng)濟(jì)樹(shù)種。而蔗糖為根部、生殖結(jié)構(gòu)、儲(chǔ)存和發(fā)育器官等的異養(yǎng)細(xì)胞提供大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),為了確保這些異樣的庫(kù)組織的生長(zhǎng)和發(fā)育接收到足夠量的蔗糖,蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在整個(gè)植物中對(duì)蔗糖的膜運(yùn)輸及分布起到關(guān)鍵作用。因此,對(duì)黃梁木的蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的研究,有助于進(jìn)一步了解蔗糖在黃梁木中轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和作用機(jī)理以便充分加以利用。本文通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的比對(duì)設(shè)計(jì)引物從黃梁木中克隆得到三個(gè)蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的全長(zhǎng)cDNA,分別命名為NcSUT2、NcSUT3和NcSUT4。這三個(gè)基因分別編碼522、623、505個(gè)氨基酸;對(duì)它們進(jìn)行生物信息學(xué)分析表明,這三個(gè)基因編碼的蛋白質(zhì)均屬于疏水性蛋白,且均具有蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白典型的十二個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。NcSUT2-GFP、NcSUT3-GFP和NcSUT4-GFP融合蛋白在擬南芥和黃梁木原生質(zhì)體的瞬時(shí)表達(dá)定位顯示,NcSUT2定位在質(zhì)膜上,NcSUT3可能定位在質(zhì)膜或葉綠體上,NcSUT4定位在葉綠體上。熒光定量分析發(fā)現(xiàn),NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4在韌皮部、嫩葉、根部、樹(shù)皮上均有表達(dá),但表達(dá)量存在明顯差異,且隨著生長(zhǎng)季的不同而有所變化,同時(shí)在不同樹(shù)齡之間也會(huì)存在表達(dá)差異。
【關(guān)鍵詞】：黃梁木 蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 基因克隆 表達(dá)模式
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S792.99
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 1.前言8-20
• 1.1 黃梁木概述8-9
• 1.2 蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白概述9-16
• 1.2.1 植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的存在10-11
• 1.2.2 植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分類(lèi)11-12
• 1.2.3 植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的亞細(xì)胞定位12-13
• 1.2.4 植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)調(diào)控13-16
• 1.2.5 植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能16
• 1.3 基因克隆的方法16-18
• 1.3.1 功能克隆16-17
• 1.3.2 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法17
• 1.3.3 圖位克隆法17
• 1.3.4 差異表達(dá)分析法17
• 1.3.5 同源克隆法17-18
• 1.4 基因表達(dá)定量分析方法概述18-19
• 1.4.1 RNA印跡18
• 1.4.2 核糖核酸酶保護(hù)分析18
• 1.4.3 蛋白質(zhì)印跡18
• 1.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR18-19
• 1.5 研究目的意義及主要內(nèi)容19-20
• 1.5.1 研究目的意義19
• 1.5.2 主要內(nèi)容19-20
• 2.材料與方法20-37
• 2.1 材料20-22
• 2.1.1 植物材料20
• 2.1.2 菌株和質(zhì)粒20
• 2.1.3 主要試劑及試劑盒20
• 2.1.4 主要儀器及設(shè)備20
• 2.1.5 主要試劑及材料配方20-22
• 2.2 方法22-37
• 2.2.1 黃梁木蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因NcSUTs的克隆22-27
• 2.2.2 黃梁木NcSUTs生物信息學(xué)分析27-28
• 2.2.3 黃梁木NcSUTs-GFP原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)的定位觀察28-33
• 2.2.4 黃梁木NcSUTs gDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增33-36
• 2.2.5 黃梁木NcSUTs表達(dá)量分析36-37
• 3.結(jié)果與分析37-54
• 3.1 黃梁木RNA提取37-38
• 3.2 黃梁木NcSUTs核苷酸序列的同源克隆38-44
• 3.3 黃梁木NcSUTs生物信息學(xué)分析44-47
• 3.3.1 蛋白理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析44-46
• 3.3.2 蛋白亞細(xì)胞定位分析46-47
• 3.4 黃梁木NcSUTs-GFP原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)的定位分析47-51
• 3.5 黃梁木NcSUTs基因表達(dá)量分析51-54
• 3.5.1 黃梁木同一器官不同基因的表達(dá)量分析51-52
• 3.5.2 黃梁木同一基因在不同器官的表達(dá)量分析52-53
• 3.5.3 黃梁木韌皮部不同樹(shù)齡NcSUTs表達(dá)量分析53-54
• 4.結(jié)論與討論54-58
• 4.1 結(jié)論54-55
• 4.2 討論55-58
• 4.2.1 黃梁木NcSUTs基因克隆及同源比對(duì)分析55
• 4.2.2 黃梁木NcSUTs亞細(xì)胞定位55-56
• 4.2.3 黃梁木NcSUTs基因的表達(dá)分析56-58
• 致謝58-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 附錄63-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 孫學(xué)武;譚炎寧;孫志忠;袁定陽(yáng);段美娟;;水稻蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究進(jìn)展[J];生命科學(xué)研究;2014年02期

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5 彭昌操;趙小蘭;;植物體內(nèi)蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能和調(diào)控[J];植物生理學(xué)通訊;2010年04期

6 戚繼艷;陽(yáng)江華;唐朝榮;;植物蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因與功能[J];植物學(xué)通報(bào);2007年04期

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本文編號(hào)：959672