本文關(guān)鍵詞：水稻谷氧還蛋白基因OsGRX20抗氧化功能的研究

  更多相關(guān)文章： 谷氧還蛋白基因OsGRX20 甲基紫精 氧化脅迫 轉(zhuǎn)基因水稻

【摘要】：谷氧還蛋白(GRXs)是植物中廣泛存在的一類(lèi)依賴谷胱甘肽的氧化還原酶,在植物生長(zhǎng)發(fā)育以及抵御逆境的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。植物中的GRXs按照活性位點(diǎn)的保守氨基酸分為CPYC型、CGFS型、CC型三類(lèi)。水稻中CPYC型GRXs的功能很少被研究,而OsGRX20是CPYC型GRXs的一種。本實(shí)驗(yàn)室前期利用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù),鑒定出1個(gè)在接種白葉枯病菌后表達(dá)量上調(diào)的蛋白,即OsGRX20蛋白,構(gòu)建了OsGRX20基因過(guò)表達(dá)和干擾載體,并獲得轉(zhuǎn)基因株系。本文則進(jìn)一步研究OsGRX20在抵抗氧化脅迫方面的功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：(1)用甲基紫精(MV)處理2個(gè)水稻品種幼苗根部后,與品種秀水11相比,甬粳50A莖部的受損傷程度較低,同時(shí),相對(duì)干重較高。甬粳50A品種中OsGRX20的表達(dá)量在MV處理和45℃高溫處理后顯著高于秀水11,說(shuō)明該基因與甬粳50A較強(qiáng)的抗氧化性有關(guān)；(2)10μM MV處理水稻根部后,OsGRX20基因過(guò)表達(dá)株系幼苗的相對(duì)鮮重和相對(duì)葉綠素含量均高于野生型,而干擾株系中結(jié)果正好相反。在MV處理24h時(shí),過(guò)表達(dá)株系中相對(duì)O2·-積累量低于野生型,說(shuō)明OsGRX20可以提高水稻的抗氧化能力；(3)分析水稻葉片抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)量。OsGRX20過(guò)表達(dá)株系中抗壞血酸過(guò)氧化物酶1基因(OsAPX1).超氧化物歧化酶B基因(OsSodB)以及過(guò)氧化氫酶C基因(OsCatC)的表達(dá)顯著上調(diào)。說(shuō)明OsGRX20可以影響OsAPX. OsSodB以及OsCatC的表達(dá),間接調(diào)節(jié)水稻的抗氧化性。(4)構(gòu)建OsGRX20和GFP的融合載體,采用農(nóng)桿菌浸潤(rùn)法,在本氏煙葉片瞬時(shí)表達(dá)重組蛋白,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察OsGRX20的亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示OsGRX20分布在煙草細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。
【關(guān)鍵詞】：谷氧還蛋白基因OsGRX20 甲基紫精 氧化脅迫 轉(zhuǎn)基因水稻
【學(xué)位授予單位】：浙江師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q946
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 縮略詞表7-11
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述11-22
• 第一章 活性氧與植物逆境11-15
• 1 植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生11-12
• 2 植物體內(nèi)活性氧的清除12-15
• 2.1 抗壞血酸和谷胱甘肽12-13
• 2.2 超氧化物歧化酶(SOD)13-14
• 2.3 抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)14
• 2.4 過(guò)氧化氫酶(CAT)14-15
• 第二章 谷氧還蛋白的研究進(jìn)展15-20
• 1 植物氧化還原系統(tǒng)15-16
• 1.1 抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)系統(tǒng)15
• 1.2 硫氧還蛋白系統(tǒng)15
• 1.3 谷氧還蛋白系統(tǒng)15-16
• 2 谷氧還蛋白的分類(lèi)16-17
• 3 谷氧還蛋白的功能17-19
• 3.1 CPYC型谷氧還蛋白(GRXs)的功能17-18
• 3.2 CGFS型谷氧還蛋白(GRXs)的功能18
• 3.3 CC型谷氧還蛋白(GRXs)的功能18-19
• 4 水稻中谷氧還蛋白(GRXs)的研究19-20
• 第三章 研究目的及意義20-22
• 1 研究目的及意義20-21
• 2 技術(shù)路線21-22
• 第二部分 研究論文22-49
• 第一章 氧化脅迫下OsGRX20在不同水稻品種中的表達(dá)模式22-31
• 1 前言22
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑22
• 2.1 材料22
• 2.2 試劑22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 3.1 水稻培養(yǎng)22-23
• 3.2 脅迫處理23
• 3.3 幼苗生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定23
• 3.4 水稻總RNA的提取23-24
• 3.5 cDNA一鏈的合成24
• 3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR24-26
• 3.7 數(shù)據(jù)分析26
• 4 結(jié)果分析26-30
• 4.1 MV處理后不同水稻品種的表型差異26-27
• 4.2 水稻RNA提取結(jié)果檢測(cè)27-28
• 4.3 不同水稻品種中OsGRX20對(duì)氧化和高溫脅迫的應(yīng)答反應(yīng)28-30
• 5 討論30-31
• 第二章 OsGRX20轉(zhuǎn)基因水稻抗氧化功能分析31-40
• 1 前言31
• 2 材料與試劑31
• 2.1 材料31
• 2.2 試劑31
• 3 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 3.1 轉(zhuǎn)基因水稻種子的篩選31
• 3.2 轉(zhuǎn)基因水稻的PCR驗(yàn)證31-32
• 3.3 氧化脅迫處理32
• 3.5 幼苗葉綠素含量的測(cè)定32
• 3.6 超氧陰離子積累量的測(cè)定32-33
• 3.7 抗氧化相關(guān)基因表達(dá)量分析33-34
• 3.8 數(shù)據(jù)分析34
• 4 結(jié)果分析34-38
• 4.1 轉(zhuǎn)基因水稻的表達(dá)驗(yàn)證34
• 4.2 MV處理對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻生長(zhǎng)特性的影響34-36
• 4.3 MV處理后水稻葉片中O_2~(·-)積累量36-37
• 4.4 MV處理后水稻葉片中抗氧化物酶相關(guān)基因的表達(dá)分析37-38
• 5 討論38-40
• 第三章 OsGRX20亞細(xì)胞定位40-49
• 1 前言40
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑40-41
• 2.1 菌株和載體40
• 2.2 試劑和培養(yǎng)基40-41
• 3 實(shí)驗(yàn)方法41-46
• 3.1 35S：：OsGRX20：：GFP融合載體的構(gòu)建41-46
• 3.2 OsGRX20的亞細(xì)胞定位46
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 4.1 35S：：OsGRX20：：GFP載體的構(gòu)建46-47
• 4.2 OsGRX20蛋白的亞細(xì)胞定位47-48
• 5. 討論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 致謝56-58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 夏海燕;黃子維;李寬鈺;;谷氧還蛋白2與人類(lèi)健康[J];生命科學(xué);2014年01期

2 張春晶;于海濤;鄒朝霞;董欽;周宏博;;谷氧還蛋白的生物學(xué)活性及其與人類(lèi)疾病的關(guān)系[J];生命的化學(xué);2006年02期

3 羅銘;江永亮;馬蕭蕭;唐雅s，

本文編號(hào)：856660