本文關(guān)鍵詞：布魯氏菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白BMEI1135基因缺失株的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：為了初步探討B(tài)MEI1135基因在布魯氏菌感染過程中的作用,以16M為模板利用同源重組和抗性替換的方法,構(gòu)建羊種布魯氏菌16M(簡稱16M)BMEI1135基因缺失株(16M△BMEI1135)。將親本株16M、疫苗株M5-90、缺失株16M△BMEI1135在相同起始濃度下震蕩培養(yǎng),觀察其生長變化趨勢;將各菌株置于強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高鹽、熱休克應(yīng)激條件下,觀察其生存率;侵染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7后,比較其在胞內(nèi)的生存能力,并在不同時間點收集細(xì)胞提取RNA,通過qRT-PCR檢測自噬相關(guān)基因的表達(dá)。研究結(jié)果顯示:成功獲得了布魯氏菌BMEI1135基因缺失株且20代內(nèi)未發(fā)生回復(fù)性突變現(xiàn)象。與親本株相比,16M△BMEI1135在體外培養(yǎng)生長趨勢與親本株相似,只是細(xì)菌的濃度存在一定差異;突變株體在外界應(yīng)激條件下生存能力低于親本株;胞內(nèi)CFU顯示侵染4 h后缺失株胞內(nèi)細(xì)菌數(shù)量明顯下降(P0.01);qRT-PCR檢測到突變株的ULKI、Beclin1表達(dá)量均顯著降低(P0.01)。本實驗的研究結(jié)果表明:布魯氏菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白與16M的胞內(nèi)生存介導(dǎo)的細(xì)胞自噬密切相關(guān),該研究為16M胞內(nèi)寄生機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 石河子大學(xué)生命科學(xué)院;石河子大學(xué)動物科技學(xué)院;商丘師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 布魯氏菌 BMEI基因 缺失株 自噬相關(guān)基因
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)研究生教育創(chuàng)新計劃科研創(chuàng)新項目(XJGRI2015040)
【分類號】：S852.61
【正文快照】： 布魯氏菌(Brucella)是一種兼性細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性菌其通過控制自身在宿主細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸來避免溶酶體的降解或抑制巨噬細(xì)胞的殺菌作用,而且能在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖而不影響細(xì)胞的基本功能[41,也不會誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡[51,從而適應(yīng)胞內(nèi)環(huán)境并導(dǎo)致慢性感染|61。 布魯氏菌IV型分，

本文編號：855749