本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因玉米檢測中的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

第30卷第6期2004年6月　602～607頁

作　物　學(xué)　報(bào)

ACTAAGRONOMICASINICA

Vol.30,No.6

pp.602～607　June,2004

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因玉米檢測中的應(yīng)用研究

陳　穎1,3　徐寶梁1　蘇　寧1　葛毅強(qiáng)2　王曙光1

Ξ

(1中國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所,北京100025;2科技部中國農(nóng)村技術(shù)開發(fā)中心,北京100045)

摘　要　采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),通過使用特異的引物和探針,對玉米中的內(nèi)源基因Invertase和轉(zhuǎn)基因玉米Mon

810、Event176中的外源基因進(jìn)行了定量檢測,建立了商業(yè)化轉(zhuǎn)基因玉米Mon810(YieldGard)和Event176(Maximizer)的定量PCR檢測方法。該方法的檢測靈敏度小于0.01%,是國際上設(shè)定的轉(zhuǎn)基因最低限量的100倍。關(guān)鍵詞　定量PCR技術(shù);轉(zhuǎn)基因玉米Mon810(YieldGard);轉(zhuǎn)基因玉米Event176(Maximizer);轉(zhuǎn)基因檢測中圖分類號:S513

Real2timeQuantitativePCRDetectionofGeneticallyModifiedMaximizer○Maize

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andYieldGard○Maize

CHENYing1,3,XUBao2Liang1,SUNing1,GEYi2Qiang2,WANGShu2Guang1

(1ChinaImportandExportCommodityInspectionTechnologyInstitute,Beijing100025;2ChinaAgriculturalTechnologyDevelopmentCentre,Beijing100045,Chi2na)

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Abstract　AreliableandsimpleReal2timequantitativepolymerasechainreactionmethodfordetectionofgeneticallymodi2fiedmaizewithABIPrism7700wasestablishedinthispaper.AsetofPCRprimersandprobeswasdesignedspecifictotransgeniccommercialmaizeMon810andEvent176.Thedetectionlimitislessthan0.01%whichis100timeslowerthanlabelingthresholdofEuropeanUnion.

○

MOdetectionKeywords　Real2timequantitativePCR;YieldGard○MaizeMon810;MaximizerMaizeEvent176;G

R

R

　　GMO(GeneticallyModifiedOrganism)食品對人類健康及生態(tài)環(huán)境的潛在影響日益受到關(guān)注,轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識已成為各國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品監(jiān)管的重要部分。已有歐盟、日本、韓國、澳大利亞、新西蘭等多個(gè)國家和地區(qū)出臺了對轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品實(shí)施強(qiáng)制性標(biāo)簽的制度,規(guī)定了食品中轉(zhuǎn)基因成分含量的最低標(biāo)識限量。挪威是第一個(gè)要求對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行含量標(biāo)識的國家,該國對轉(zhuǎn)基因成分的限量標(biāo)識低限為2%[1];而瑞士與歐盟規(guī)定的限量標(biāo)識低限為1%[2,3],韓國、日本、泰國也有相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因限量標(biāo)

情權(quán)。因此,針對不斷商品化的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品建立相應(yīng)的定性特別是定量檢測方法,是進(jìn)一步加強(qiáng)我國在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品監(jiān)管方面的重要技術(shù)保障。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real2timeFluorescenceQuantitativePCRDetection)是近年來定量PCR技術(shù)中

興起的最新定量檢測技術(shù)。在該技術(shù)體系中,除了有兩條普通引物即與目標(biāo)DNA特異序列相結(jié)合的引物外,還有一條在5′和3′端分別標(biāo)記了報(bào)告熒光染料基團(tuán)(R)和淬滅熒光染料基團(tuán)(Q),并與PCR產(chǎn)物特異片段相結(jié)合的寡核苷酸探針。當(dāng)探針完整時(shí),R基團(tuán)發(fā)出的熒光被Q基團(tuán)所淬滅,一旦探針被切斷,淬滅作用消失,R基團(tuán)發(fā)出的熒光就可以被檢測到。在PCR反應(yīng)過程中,上下游引物與目標(biāo)DNA的特異序列相結(jié)合,探針則與PCR產(chǎn)物相結(jié)合。在PCR延伸階段中TaqDNA酶的5′—3′外切活性將

識法規(guī),標(biāo)識低限分別為3%、5%、3%～5%。我國于2002年1月5日頒布了《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理辦法》,該管理辦法明確規(guī)定對轉(zhuǎn)基因生物的標(biāo)識管理就是為了規(guī)范農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的銷售行為,引導(dǎo)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的生產(chǎn)和消費(fèi),保護(hù)消費(fèi)者的知

Ξ基金項(xiàng)目:科技部社會(huì)公益研究專項(xiàng)資金項(xiàng)目“進(jìn)出口食物中轉(zhuǎn)基因成分的檢測研究”。

作者簡介:陳穎(1972-),女,博士后/高級工程師,北京市朝陽區(qū)高碑店北路甲3號(100025)。Tel:010285753925(O)E2mail:yqychen@ya2

Received(收稿日期):2002212209,Accepted(接受日期):2003208212.

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