本文關(guān)鍵詞：FABP4轉(zhuǎn)基因牛的分子生物學(xué)鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014,47 24 :4895-4903 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.24.013 FABP4轉(zhuǎn)基因牛的分子生物學(xué)鑒定 1 1 3 2 1 1 1 1 1 1 趙敬賢 ，李 娟 ，嚴(yán)興榮 ，倪和民 ，陳 燕 ，張路培 ，高會(huì)江 ，許尚忠 ，李俊雅 ，高 雪 1 2 3 （中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193 ； 北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206 ； 西北大學(xué)，西安 710068 ） 摘要：【目的】對(duì)前期獲得的 3 頭轉(zhuǎn)基因牛進(jìn)行分子生物學(xué)評(píng)價(jià)，包括轉(zhuǎn)基因陽性鑒定、基因及蛋白表達(dá)水 平的檢測(cè)，旨在進(jìn)一步為轉(zhuǎn)基因牛的安全評(píng)價(jià)提供一些科學(xué)依據(jù)�！痉椒ā扛鶕�(jù) GenBank 上公布的牛 FABP4 基因 （GenBank登錄號(hào)：NM_174314）mRNA序列，利用兼并密碼子對(duì)現(xiàn)有FABP4 基因進(jìn)行突變，并構(gòu)建了pEGFP-C1-FABP4 真核表達(dá)載體、通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染、體細(xì)胞核移植、胚胎移植技術(shù)獲得 3 頭轉(zhuǎn)基因牛；分別采集了 1 號(hào)轉(zhuǎn)基因牛不同 組織樣，2、3 號(hào)轉(zhuǎn)基因牛與野生型個(gè)體 8、10、12、14 月齡的血液樣本，利用 RT-PCR 技術(shù)對(duì)所獲轉(zhuǎn)基因個(gè)體的 陽性與否進(jìn)行了鑒定；同時(shí)利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了1 號(hào)轉(zhuǎn)基因牛不同組織中外源性FABP4基因的表達(dá)情況， 并分析了2、3 號(hào)轉(zhuǎn)基因牛在8―14月齡之間，外源性FABP4基因、內(nèi)源性FABP4基因的變化趨勢(shì)，并通過疊加轉(zhuǎn) 基因牛外源與內(nèi)源性 FABP4 基因的表達(dá)量，分析了轉(zhuǎn)基因牛和非轉(zhuǎn)基因牛 FABP4 基因的整體表達(dá)水平差異；通過 Western blotting 技術(shù)分析了 3 頭轉(zhuǎn)基因牛外源性 FABP4 基因的蛋白表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】①對(duì)所獲得的 3 頭轉(zhuǎn)基 因牛RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，3頭轉(zhuǎn)基因個(gè)體各樣本均在205 bp 處產(chǎn)生條帶，而妊娠母牛及陰性對(duì)照在205 bp處均未 有條帶出現(xiàn)，初步表明 3 頭轉(zhuǎn)基因牛均為轉(zhuǎn)基因陽性。②實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測(cè)表明，，1 號(hào)轉(zhuǎn)基因牛

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