甲基營養(yǎng)菌M.sp.MB200是本實驗室保存的一株可以利用甲醇為碳源的甲基營養(yǎng)菌,具有利用甲醇作為底物生產(chǎn)L-絲氨酸的能力。提高其耐底物濃度的能力,有利于L-絲氨酸的轉(zhuǎn)化。以M.sp.MB200野生菌株作為出發(fā)菌株,通過三親本結(jié)合進行同源單交換構(gòu)建突變修復(fù)基因mutL插入突變菌株MB200mTB,該突變株無法修復(fù)菌體在繁殖傳代過程中產(chǎn)生的各種隨機突變,以甲醇為碳源進行環(huán)境壓力篩選,具有甲醇耐受突變的菌株可以在甲醇濃度不斷升高的環(huán)境中生長,而其余突變方向菌株在高甲醇環(huán)境下不能生長,進而篩選出甲醇耐受方向的突變株。對耐高濃度甲醇的菌株使用三親本結(jié)合回補mut L基因,得到了7株可以在甲醇濃度為7%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長性狀優(yōu)異的突變株。在含7%甲醇的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,MB200mHB1號突變株較出發(fā)菌株M.sp.MB200甲醇耐受性提升近4倍,菌體生長量增加2.2倍。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌種與質(zhì)粒
        1.1.2 培養(yǎng)基
        1.1.3 常用抗生素及使用濃度
        1.1.4 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 M.sp.MB200和突變菌株
        1.2.2 mutL基因和部分mutL片段(mutLps)的PCR擴增和DNA測序
        1.2.3 原始菌株M.sp MB200的耐甲醇性
        1.2.4 Mut L基因突變株MB200mTB的構(gòu)建
        1.2.5 突變株MB200mTB的耐甲醇誘導(dǎo)
        1.2.6 表達載體pCM80-mutL的構(gòu)建
        1.2.7 耐高甲醇濃度重組株MB200mHB菌株構(gòu)建
        1.2.8 重組菌株遺傳穩(wěn)定性研究
        1.2.9 重組菌株生長情況分析
2 結(jié)果與討論
    2.1 菌株M.sp MB200的甲醇耐受
    2.2 突變體的構(gòu)建與篩選
    2.3 菌株MB200mTB的甲醇誘導(dǎo)突變
    2.4 重組菌株MB200mTB的構(gòu)建
    2.5 重組株MB200mHB遺傳性狀穩(wěn)定性
    2.6 野生菌與重組菌生長情況分析
3 結(jié)論



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