目的建立一種方便、靈敏的水貂阿留申病毒（AMDV）熒光定量PCR檢測(cè)方法,從而實(shí)現(xiàn)臨床樣品中AMDV的快速定量檢測(cè)。方法根據(jù)AMDV的結(jié)構(gòu)蛋白VP2的基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物和探針,優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,建立TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行特異性、敏感性和穩(wěn)定性分析。結(jié)果建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線在1.0×10～2拷貝/μL至1.0×10～8拷貝/μL之間具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)（r²）大于0.994。該方法檢測(cè)的靈敏度為10～2拷貝/μL,且與犬細(xì)小病毒、犬腺病毒、犬瘟熱病毒和水貂病毒性腸炎病毒均無(wú)明顯交叉反應(yīng),特異性良好。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法的組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于3%,重復(fù)性良好。利用該方法對(duì)417份臨床組織樣品進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果顯示,中國(guó)部分地區(qū)的AMDV陽(yáng)性率為81.5%。結(jié)論本研究建立了一種重復(fù)性、特異性和敏感性良好的AMDV熒光定量PCR檢測(cè)方法,可用于AMDV的臨床檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒與樣品
        1.1.2 主要儀器和試劑
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        1.2.3 熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
        1.2.4 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        1.2.5 敏感性試驗(yàn)
        1.2.6 特異性試驗(yàn)
        1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
        1.2.8 臨床樣品檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    2.2 熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    2.3 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
    2.4 熒光定量PCR檢測(cè)的敏感性和特異性
    2.5 熒光定量PCR檢測(cè)AMDV VP2基因重復(fù)性
    2.6 臨床樣品的檢測(cè)驗(yàn)證
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