為了篩選出中華蜜蜂氣味受體基因AcerOr2最佳干擾效率的序列,以中華蜜蜂氣味受體AcerOr2基因?yàn)榘袠?biāo),分別選取3個(gè)片段AcerOr2-1(411 bp)、AcerOr2-2(205 bp)和AcerOr2-3(471 bp),并構(gòu)建相應(yīng)的dsRNA表達(dá)載體,獲取dsRNA后進(jìn)行RNAi試驗(yàn),通過(guò)qPCR和Western從mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)干擾效率。mRNA結(jié)果顯示,飼喂3個(gè)不同的片段AcerOr2-1(411 bp)、AcerOr2-2(205 bp)和AcerOr2-3(471 bp)對(duì)AcerOr2表達(dá)量均會(huì)產(chǎn)生抑制作用,抑制率分別為69.72%±0.49%、47.26%±0.25%、73.17%±0.97%,抑制率最佳的是471 bp的dsRNA AcerOr2-3。Western Blot結(jié)果顯示,飼喂3個(gè)大小不同的干擾片段后AcerOr2蛋白的表達(dá)量均受到顯著抑制。試驗(yàn)成功構(gòu)建AcerOr2基因干擾載體,最終確定471 bp的dsRNA AcerOr2-3為最佳干擾片段,證實(shí)其能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果可為進(jìn)一步應(yīng)用RNAi技術(shù)研究該基因的...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 供試蜜蜂
        1.1.2 主要試劑、菌株、質(zhì)粒
    1.2 方法
        1.2.1 AcerOr2基因dsRNA的合成
        1.2.2 中華蜜蜂飼喂dsRNA試驗(yàn)
        1.2.3 RNA干擾效果檢測(cè)
            1.2.3. 1 qPCR檢測(cè)干擾效果
            1.2.3. 2 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)干擾效果
    1.3 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 dsRNA模板合成檢測(cè)
    2.2 體外合成的dsRNA檢測(cè)
    2.3 最佳干擾片段篩選
3 結(jié)論與討論



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