發(fā)布時間：2025-04-11 05:09

　　C2H2型鋅指蛋白是鋅指家族中最經(jīng)典也是目前研究最為深入的一類鋅指蛋白。該類鋅指蛋白中具有在植物中特有的基序QALGGH,表明C2H2型鋅指蛋白在植物的生長過程中發(fā)揮了重要的作用。此外,它還參與非生物脅迫和生物脅迫。本研究利用生物信息學方法和軟件,對番茄基因組中C2H2家族成員進行全面鑒定挖掘,并對該家族進行了系統(tǒng)的生物信息學分析,同時對部分家族成員進行了組織特異性及逆境脅迫下的表達模式分析,為該家族基因的深入研究奠定基礎,研究結果表明:1番茄基因組共編碼99個C2H2型鋅指蛋白轉錄子基因,基于進化分析將這99個基因分成4組。將每個C2H2型鋅指蛋白的物理性質(zhì)相關數(shù)據(jù)如,分子質(zhì)量、pI值和蛋白質(zhì)長度進行了統(tǒng)計。分析了該家族蛋白的基因結構,并找到了15個基序。99個C2H2型鋅指蛋白轉錄子基因中有96個不均等的分步在12條染色體上。分析得到了一些與脅迫相關、激素相關、組織特異性表達相關的啟動子序列。2將全家族99個基因進行因物設計,并最終成功設計出21個家族成員的引物序列。對21個典型的C2H2型鋅指蛋白轉錄子基因進行組織特異性表達模式分析,結果表明,SlZF-24和SlZF-28在根中表...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 研究的目的與意義
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 C2H2型鋅指蛋白的概念與結構
        1.2.2 C2H2型鋅指蛋白的分類
        1.2.3 C2H2型鋅指蛋白的功能
        1.2.4 番茄中的C2H2型鋅指蛋白
    1.3 技術路線
2 材料與方法
    2.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族生物信息學的分析
        2.1.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族成員的鑒定和進化分析
        2.1.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因結構和基序分析
        2.1.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因染色體定位
        2.1.4 番茄C2H2型鋅指蛋白基因順式作用元件分析
    2.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因組織特異性表達及脅迫處理下熒光定量表達分析
        2.2.1 植物材料和脅迫處理
        2.2.2 營養(yǎng)液的配制
        2.2.3 RNA的提取和反轉錄
    2.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因SlZF-36VIGS分析
        2.3.1 pTRV2:SlZF-36沉默載體構建
        2.3.2 番茄植株侵染
        2.3.3 SlZF-36沉默植株鑒定
        2.3.4 SlZF-36沉默植株脅迫處理及基因表達量檢測
    2.4 脅迫植株的相關生理指標的測定
        2.4.1 丙二醛(MDA)活性檢測
        2.4.2 過氧化物酶(POD)活性檢測
        2.4.3 氣孔觀察
        2.4.4 活性氧檢測
        2.4.5 葉綠素熒光參數(shù)檢測
3 結果與分析
    3.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族生物信息學的分析
        3.1.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族成員鑒定及進化分析
        3.1.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因結構和基序分析
        3.1.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因染色體定位
        3.1.4 番茄C2H2型鋅指蛋白基因順式作用元件分析
    3.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因組織特異性表達分析
        3.2.1 植物組織取樣結果
        3.2.2 RNA提取結果
        3.2.3 組織特異性表達分析
    3.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因在脅迫處理下熒光定量表達分析
        3.3.1 脅迫處理下番茄葉片總RNA提取
        3.3.2 脅迫處理基因的表達分析
    3.4 pTRV2:SlZF-36基因沉默載體的構建及農(nóng)桿菌侵染
        3.4.1 SlZF-36片段擴增
        3.4.2 pTRV2空載質(zhì)粒及pTRV2:PDS質(zhì)粒提取
        3.4.3 質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.4.4 重組質(zhì)粒測序結果
        3.4.5 PDS沉默結果
        3.4.6 SlZF-36沉默植株脅迫處理表型觀察結果
    3.5 SlZF-36沉默植株和空載對照植株脅迫處理基因表達量檢測
    3.6 SlZF-36沉默植株相關生理指標的測定
        3.6.1 丙二醛(MDA)活性檢測
        3.6.2 過氧化物酶(POD)活性檢測
        3.6.3 氣孔觀察
        3.6.4 活性氧檢測
        3.6.5 葉綠素熒光參數(shù)檢測
4 討論
    4.1 番茄C2H2型鋅指轉錄因子家族生物信息學分析
    4.2 番茄C2H2型轉錄因子家族基因表達分析
    4.3 番茄SlZF-36基因沉默載體遺傳轉化分析
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文



本文編號：4039559