發(fā)布時間：2024-11-20 21:53

　　結(jié)直腸癌KRAS基因位于人體12號染色體的2號外顯子(Exon)上,在膜受體到腺苷酸環(huán)化酶的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的作用。近年來,KRAS基因與抗EGFR抗體療效具有相關(guān)性是結(jié)直腸癌的研究領(lǐng)域中最突出的成果。研究結(jié)果顯示,只有KRAS未突變的患者,才推薦使用抗表皮生長因子受體(EGFR)單克隆抗體進(jìn)行治療。因此,靶向用藥前的基因突變檢測顯得尤為重要。本研究擬建立一種經(jīng)濟(jì)、簡便且靈敏度高的結(jié)直腸癌KRAS基因檢測技術(shù)。通過基因克隆成功構(gòu)建出7種常見的KRAS基因突變序列,并設(shè)計(jì)7種等位基因引物和共用Taqman探針。單對引物檢測構(gòu)建成功的突變模板及等位基因引物和Taqman探針的特異性。7對引物混合后加入Taqman探針,利用qPCR分別檢測構(gòu)建成功的7種常見KRAS基因突變序列,搭建穩(wěn)定的檢測體系。對構(gòu)建的混合等位基因引物和Taqman探針qPCR檢測體系進(jìn)行分析性能測試:(1)結(jié)直腸癌KRAS野生型組織DNA為背景,將7種KRAS突變序列制備成相當(dāng)于10%、1%、0.1%和0.01%突變濃度的樣品。結(jié)果顯示,最低檢測限為0.1%。(2)結(jié)直腸癌KRAS野生型組織DNA為背景,分別檢測含有5...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1KRAS基因編碼蛋白結(jié)構(gòu)

已知有三種類型的RAS基因(HRAS、KRAS和NRAS)與人類腫瘤相關(guān)。位于12號染色體上的KRAS基因，其所編碼的RAS蛋白，作為表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)發(fā)揮信號傳遞功能的組成部分，在....

圖1.2KRAS基因突變狀態(tài)調(diào)控機(jī)制

圖1.2KRAS基因突變狀態(tài)調(diào)控機(jī)制近些年來，KRAS基因狀態(tài)與抗EGFR抗體藥物治療之間具有顯著的相關(guān)性的研究結(jié)果是結(jié)直腸癌治療領(lǐng)域中的一項(xiàng)重大的發(fā)現(xiàn)。對于研究KRAS的基因狀態(tài)與抗EGFR藥物兩者之間關(guān)系的過程中，早在十年前的美國臨床腫瘤學(xué)會(Americ....

圖2.1構(gòu)建KRAS基因突變序列示意圖

16圖2.1構(gòu)建KRAS基因突變序列示意圖2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)菌株與培養(yǎng)基感受態(tài)Top10細(xì)胞及pUC57載體購于賽默飛世爾(中國)有限公司LB液體培養(yǎng)基(1L)：蛋白胨10g、酵母浸粉5g、NaCl10g。LB固體培養(yǎng)基(1L)：蛋....

圖2.2KRAS基因突變序列1%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證結(jié)果

菌的ddH2O于吸附柱的膜中間部位，為了使吸附柱中的核酸被完全洗脫下來需試驗(yàn)臺內(nèi)靜止5min，1.2×104rpm離心2min收集含有構(gòu)建好的KRAS突變序列的質(zhì)粒溶液。(11)吸附柱中可能會殘留質(zhì)粒，通過將步驟(10)中收集的質(zhì)粒溶液重新加入吸附柱中，1.....

本文編號：4012413