為探討大豆PHD-finger轉錄因子家族編碼基因GmPHD3在抵抗中國南方高溫高濕非生物脅迫造成種子劣變過程中的調控作用,分離全長GmPHD3基因并進行生物信息學分析、亞細胞定位和轉錄激活活性分析,以種子劣變抗性品種湘豆3號和不抗品種寧鎮(zhèn)1號葉片及不同組織cDNA為材料,通過RT-PCR,進行組織表達模式分析和高溫高濕脅迫下的表達模式分析。生物信息學分析結果表明基因CDS序列長度為738 bp,編碼246個氨基酸,包含Alfin和PHD-finger 2個結構域。進化樹結果表明該基因與木豆ALFIN-Like 3-like（XM₀20363358.1）的遺傳距離較近。亞細胞定位結果顯示該蛋白在細胞核內表達。轉錄激活試驗結果表明基因全長有轉錄激活活性,激活域為N端Alfin結構域,C端PHD-finger結構域無轉錄激活活性。組織表達模式分析發(fā)現(xiàn)該基因主要在成熟期高表達,且2個品種間存在差異。脅迫下的表達模式分析發(fā)現(xiàn)隨著脅迫時間的延長,基因的表達量逐漸升高。研究結果為進一步闡明高溫高濕脅迫下的調控機制研究奠定一定理論基礎。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試驗設計
    1.3 方法
        1.3.1 RNA提取與cDNA第一鏈合成
        1.3.2 基因的分離與生物信息學分析
        1.3.3 亞細胞定位載體構建及蛋白定位觀察
        1.3.4 酵母表達載體構建及轉錄激活活性分析
        1.3.5 qRT-PCR分析
    1.4 數(shù)據(jù)分析
2 結果與分析
    2.1 基因的分離與生物信息學分析
    2.2 GmPHD3蛋白的亞細胞定位
    2.3 轉錄激活活性分析
    2.4 組織表達模式分析
    2.5 高溫高濕脅迫下的基因表達模式分析
3 討 論
4 結 論



本文編號：4006154